医疗器械无菌实验课件PPT.ppt

医疗器械无菌实验;概 述 实验器材 实验准备 实验方法 抑菌验证 总 结;概 述;; “无菌实验”的概念： 无菌实验是用于检验一次性使用无菌医疗器械是否染有活菌的一种方法。本实验系将医疗器械或其浸提液接种于培养基内，以检验供试品是否有细菌和真菌污染，其全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染，同时也应避免在抑菌条件下进行实验操作。;3. 试剂 75%(V/V)乙醇、新洁尔灭(1：1000)溶液或其他适宜消毒溶液， 2mol/L盐酸溶液、2mol/L氢氧化钠溶液等； 质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液、其他符合2005年版《中国药典》附录XI H“无菌检查法”要求的稀释液和冲洗液（0.1%的蛋白胨水溶液和pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液等）。 ;实验准备;1.3 将注射器、针头配对，检查针头是否畅通后，将注射芯、管和针头分别放在双层纱布(或布)内，包扎严密，置带盖容器(如铝制饭盒)内，盖严，用灭菌袋或牛皮纸包扎好后，灭菌备用。 1.4 无菌衣、裤、帽、口罩等洗净晾干，配套，用灭菌袋或牛皮纸包严，湿热灭菌备用或使用一次性的无菌物品。 1.5 灭菌条件为121℃湿热灭菌20分钟，物品切勿立即取出置冷处，以免急速冷却，使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，以致染菌。适于高温灭菌的器皿也可采用160℃干热灭菌2小时。 ;2. 培养基的准备 2.1 培养基的制备 硫乙醇酸盐流体培养基用于培养好氧菌、厌氧菌，改良马丁培养基用于培养真菌。 一般采用商品脱水培养基，临用时按照使用说明书进行配制，需注意培养基的PH值应符合规定，否则必须校正后，灭菌使用。 制备好的培养基应保存在2-25℃、避光的环境。培养基若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用。若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。 ;对于硫乙醇酸盐流体培养基，在供试品接种前，其氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5。否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并应防止被污染。无菌试验培养时间结束时，氧化层高度不得超过培养基深度的1/2。 2.2 培养基的无菌性检查 临用前须对配制好的培养基进行无菌性检查，每批培养基随机取不少于 5 支（瓶），培养14天，证明无菌生??后方可使用。 ;2.3 培养基灵敏度检查 2.3.1 标准菌株 金黄色葡萄球菌 CMCC（B）26 003 铜绿假单胞菌 CMCC（B）10 104 枯草芽孢杆菌 CMCC（B）63 501 生孢梭菌 CMCC（B）64 941 白色念珠菌 CMCC（F）98 001 黑曲霉 CMCC（F）98 003 ;2.3.2 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30-35℃培养18-24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，23-28℃培养24-48小时；上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成每lmL含菌数小于100cfu的菌悬液。 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23-28℃培养5-7天，加入3-5ml0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1mL含孢子数小于100cfu的孢子悬液。;2.3.3 培养基接种及结果判断 取每管装量为12mL的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天； 取每管装量为9mL的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。 逐日观察结果。空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。;3. 无菌室要求 无菌医疗器械生产企业应将微生物检测作为检测工作的重点，而微生物实验室承担着灭菌验证、环境监控、产品放行等一系列重要工作，所以说无菌医疗器械生产企业拥有一个微生物实验室是十分必要的 。微生物实验室应满足无菌实验对工作环境的要求，环境洁净度10000级，无菌室操作台或超净工作台局部应符合洁净度100级单向流空气区域要求。;无菌室分缓冲间和无菌操作室。缓冲间及操作室内均设置照明灯和紫外灯，在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩等。无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流动装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，工作台内应准备好酒精灯、打火机、镊子、剪刀、75%酒精棉等。 无菌室应在每周和每次操作前用75%(V/V)乙醇或0.1%新洁尔灭或其他适宜消毒液擦拭工作台面及可能污染的死角，开启无菌空气过