胶体金技术简介PPT.pptVIP

* 胶体金技术简介 周军 BioDot中国 胶体金技术的起源 1971年,Faulk 和Taytor在做免疫金电镜实验时引入 胶体金：是一种分散相颗粒在1～100nm之间的分散体系，外观透明不浑浊，在普通显微镜下看不见；颜色为红色,指示剂 胶体金复合物（conjugate）:与抗体连接 胶体金技术的发展 80年代：第一代产品，免疫渗滤法 (Flow Through) 90年代：第二代产品，免疫层析法（Lateral Flow）,女性妊娠 HCG 21世纪：快速诊断方法适应市场需要，胶体金技术进入快速发展期，成为IVD的热点（传染病、毒品、食品安全、畜牧兽医等领域） 两种技术的比较 免疫层析法技术优势:简单/现场/快速 1.打开包装取出试纸条 2.直接插入待测样品中 3. 目测读出结果（3-10分钟内） 免疫层析法应用领域 类别 应用领域 检测的物质 人类医学 各级医院,血站,CDC,防疫站,诊断中心；家庭自检；商检系统；边检口岸；公安系统. 女性妊娠（hCG,LH等) 传染病（乙肝五项、艾滋,、梅毒、流感等） 肿瘤标志物（AFP、、粪便血红蛋白等） 心梗系列(肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶） 毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒等） 农牧业 畜牧兽医站, 商检系统,边检口岸,农牧类院系和研究所 传染病（禽流感、兽瘟疫等） 病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等） 环境 环保监测部门,研究机构 有害物质超标 食品安全 食品安全检测中心,各监管部门 农兽药残留（磺胺类、瘦肉精等）、大肠杆菌、黄曲霉素 免疫层析法试纸条结构 测试线 （T线） 质控线（C线） 胶体金垫 吸水滤纸 样品垫 NC膜（硝酸纤维素膜） 层析方向 PVC底板 免疫层析法原理视频 免疫层析法检测原理分类介绍（双抗体夹心法） （以大分子HCG检测为例） 免疫层析法检测原理分类介绍（竞争法） （以小分子吗啡检测为例） 免疫层析法检测原理分类介绍（间接法，标记proteinA） （以HIV抗体检测为例） 免疫层析法检测原理分类介绍（双抗原夹心法，标记抗原） 同上，测抗体 技术流程 Assembled Cards Test strips cut FINAL PRODUCT Processes Reagents Materials Desiccant Adhesive Cards Top Laminate Absorbent Pad Membrane Conjugate Pad Sample Pad Pouch Housing Packaging Capture Reagents Detector Reagent Salts+ 平台准备与技术分项 材料准备: 样品垫、胶体金垫、NC膜、吸水纸 试剂准备:免疫试剂如抗原抗体等生物活性原料；生化试剂如氯金酸、柠檬酸三纳、氯化纳、Tween20、BSA等 仪器准备：常规仪器pH计、加热平台、冷冻离心机等；专用仪器喷膜仪、切条机等 胶体金标记技术 NC膜与溶液喷点 胶体金垫与溶液喷点 干燥方法 抗体 Antibody 来源差异: 鼠抗,兔抗和羊抗 种类差异: 单抗,多抗 腹水的处理: 饱和硫酸铵沉淀法 特异性:亲和层析柱 溶解液:不含盐,例如PB 抗原抗体生物原料优质的原料是优质产品的保证 抗原 Antigen 天然抗原,重组抗原,合成抗原 偶联抗原物质: BSA, OVA等 胶体金标记技术 容器清洁或硅化处理 胶体金颗粒制备 (负电) 颜色与颗粒的关系. 最佳标记颗粒大小40nm. 蛋白质最适用量测定:盐析法 NC膜与溶液喷点-NC膜 NC膜的性能 NC膜的选择 爬速对灵敏度的影响 底衬的作用 不同膜厂家的产品差异(Pall/Whatman/Millipore/Sartorius) NC膜与溶液喷点---溶液喷点  C\T线溶液前处理: 1.过滤,0.2um孔径滤膜 2.离心1万转10分钟 喷点过程 头尾去除,喷点中的报废标志 C\T线喷点工艺(BJQ3000喷头)与接触划线(FL1000喷头)工艺比较 胶体金垫与溶液喷点 胶体金垫 1.材料选择 2.糖的作用 3.缓冲溶液的作用 喷点法与浸泡法的比较(AJQ3000喷头) 1.释放快慢 2.液体量不同，干燥快慢，边缘效应 3.生产方便性 样品垫 材料选择 各成分的作用 1.缓冲溶液的作用 (PH) 2.盐的作用 3.大分子蛋白BSA\PVP 4.表面活性剂 Tween-20,TritonX-100 吸水纸 吸水效率 进口与国产纸的差异 粘性底板 原理作用 供应商的选择 对NC膜的影响 干燥方法 干燥方法的比较 1.冷冻干燥法 2. 烘箱 3.烘房 温湿度的控制 1