乙烯受体基因LeETR1和LeETR2在番茄乙烯受体系统中生理学功能定位.pdf

摘要 乙烯是调控植物生长发育的一种重要激素，植物内源乙烯的生物合成、信号 转导和生物效应的调控研究一直是一个热门课题。现在乙烯生物合成的途径已经 阐明，而乙烯信号转导的研究则方兴未艾，目前主要集中在模式植物拟南芥上。 但拟南芥无法作为呼吸跃变型果实的成熟模型。 和LeETR2部分特异序列反向导入番茄植株，获得这两个受体基因表达受到抑制 的转基因番茄植株的基础上，从T1代转基因植株中筛选转基因纯合株系，研究 以及果实成熟特性与野生型番茄的差异。主要结果如下： 1、根据NPT-II基因对卡那霉素的抗性，我们采用卡那霉素筛选转基因番茄 (T1)植株获得了理想的结果。我们对T1代番茄幼苗的根进行了GUS染色检 测。结果表明在检测的T1代番茄幼苗中，阳性率为73．5％，染色组织呈深蓝色， 而阴性对照则不染色，但不同阳性植株根部GUS染色后的表现则有所不同，有 的植株整个组织都呈蓝色，而有的植株只在根的部分区域呈蓝色斑点。 2、根据Npt．II基因和转入反义基因的序列设计引物，利用PCR的方法从 T1代番茄中筛选出阳性植株；研究了GUS基因在T1代花粉中的表达规律。结 果发现纯合植株番茄的花粉在37℃下培养染色5h后GUS基因全都表达，杂合 体番茄植株表达了GUS基因和非表达的比例为1：1，对照植株的花粉无论在37 方法能够快速、可靠地从T1植株中筛选出纯合株系。 3、以LeETRl和LeETR2 cDNA为探针，研究了转基因番茄植株和野生型 基因的表达明显减弱；而LeETRl基因的表达基本不受影响。 4、对转基因番茄和野生型番茄幼苗的三重反应研究表明，在『F常空气条件 F，LeETR2反义转基因番茄幼苗的苗高和根的长度低于野生型植株，表现出一 种不完全的乙烯组成性反应。在乙烯诱导的条件下，转基因(LeETR2)番茄幼苗 VI 仍表现出『F常的三重反应，但与对照相比，转基因幼苗根的伸长受到了乙烯的强 烈抑制，根毛的生长被完全抑制。提示LeETR2的反义抑制导致幼苗的乙烯敏感 性提高。 5、在正常生长条件下，LeETR2反义转基因番茄植株和野生型的叶片都没有 ul，l的乙烯处理24h时，转基因植株没 表现出明显的偏上生长特性。当使用25 有观察到明显的表型变化，而野生型植株则表现出强烈的偏上生长。说明转入反 义LeETR2后枝叶对乙烯的敏感性下降。 6、LeETR2反义转基因番茄叶柄和花外植体脱落速度显著低于野生型番茄。 乙烯能够促进脱落，但转基因(LeE豫2)番茄外植体的脱落速度低于野生型植 株，说明LeETR2的表达受到抑制以后，外植体对乙烯的敏感性下降。 7、研究了LeETR2反义转基因番茄外植体脱落区纤维素酶活性的变化规律。 用乙烯处理引起纤维素酶活性增加，但野生型材料的纤维素酶活性比转基因植株 (LeE豫2)增加的快，酶活性也高的多。表明野生型植株较快的脱落速度与较 高的纤维素酶活性有关系。正常情况下纤维素酶受乙烯诱导表达，表明LeETR2 的反义抑制也影响了纤维素酶的乙烯诱导机制。 被反义抑制后，果实的成熟与衰老特性与对照番茄有明显的不同：(1)成熟推迟 (2)番茄红素的合成受到显著抑制，果实没有表现出正常的红色果皮(3)果实 推迟软化；而LeETR2基因被反义抑制以后，果实的成熟没有受到显著的影响。 9、研究了番茄果实成熟过程中1-MCP处理对果实成熟的影响作用。结果表 明用1-MCP处理绿熟的番茄能够显著地抑制果实的着色、软化过程以及乙烯产 量。分析了1-MCP处理对番茄果实中受体基因表达的影响，发现在果实成熟过 程中1-MCP能够抑制NR基因的表达。 10、在番茄乙烯受体基因家族中，目前已经克隆了6个成员。综合他人及我 们自己的研究结果，推测在不同的组织中，这些受体基因可能具有多种调控模式； 在不同的受体之间不仅存在功能上的互补作用，还存在功能上的明确分工。我们 首次报道了kETRl在果实成熟调控中的明确功能；kETR2则作为基础乙烯受 体，存番茄的营养生长发育中起着多方面的作用。 关键词： 番茄 乙烯受体LeETRlLeETR21-MCP VII