zj基因工程第6章(重组DNA的方法)PPT.ppt

第六章 重组DNA技术; 基因工程的操作过程;DNA的酶切与连接策略重组率;1 DNA的酶切与连接策略 在选择外源DNA同载体分子连接反应的程序时，需要考虑到下列三个因素：实验步骤要尽可能简单易行；连接形成的接点序列，最好能被一定的核酸内切限 制酶重新切割，以便回收插入的外源DNA片段；对转录和转译过程中密码结构的阅读不发生干扰；;同种内切酶生产的粘性末端的连接;1.1 外源DNA片段定向插入载体分子;1.2 非互补粘性末端DNA分子间的连接;1.2.1 同聚物加尾法连接(5`突出末端);1.2.1 同聚物加尾法连接(3`突出末端);C 3 ;1.2.2 衔接物连接法;;1.2.3 DNA接头连接法;2 重组率;2.2 提高重组率的方法 提高外源DNA片段与载体的分子比：5 : 1 - 10 : 1； 载体DNA分子在连接前先除去磷酸基团； 使用同聚物加尾连接技术； 应用柯斯质粒;载体DNA分子在连接前先除去磷酸基团： ; 基因工程的操作过程;EcoRI;Test Transformation;如何赋于体外连接DNA分子以生命力？;Competent cells and Transformation;第二节 重组DNA分子的转化 和扩增（转与增）;1.2 选择受体细胞的基本原则;⑤安全性高，无致病性，不会对外界环境造成生