卫生监测 食品微生物检验PPT.ppt

食品微生物实验室 常用仪器及用途 ;洁净工作台（超净工作台、无菌台）;生物安全柜;高压灭菌锅;烘箱;水浴锅;显微镜;分光光度计;pH计;离心机;PCR仪;真空泵 冰箱 纯水机 振荡器/均质机 移液器 ;食品微生物检验技术;主要内容;无菌操作基本技术; 一、在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区。 二、执行无菌操作前，先戴帽子、口罩、洗手，并将手擦干，注意空气和环境清洁。 三、夹取无菌物品，必须使用无菌持物钳。 四、进行无菌操作时，凡未经消毒的手、臂、均不可直接接触无菌物品或超过无菌区取物。 五、在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，并认真洗手和消毒。在操作时，严禁喧哗，严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等。倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。对于吸管应先用手拿后1/3处，并用酒精灯烧烤之后再吸液体。;1、液体样品采样方法;2、半固体样品采样方法;3、固体样品采样方法;常见卫生指标及致病菌;菌落总数的测定;菌落总数的检验程序;（1）以无菌操作，将样品25g（或25mL）剪碎以后，放于含有225mL灭菌生理盐水三角瓶内，经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。固体样品在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000r/min-100000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。 （2）用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。 （3）另取1mL的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。 ;（4）对检样污染情况的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 （5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46 ℃ 营养琼脂培养基注入平皿15mL-20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL生理盐水的灭菌平皿内作空白对照。 （6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（36±1）℃恒温箱内培养（48±2）h取出??计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1g（1mL）样品所含菌落总数。 ;样品稀释程序;菌落计算方法 可用肉眼观查，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（CFU)表示。;①平板菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间,无蔓延菌落生长的平板作为菌落总数。30记录具体菌落数，300的记录多不可计；每个稀释度应采用两个平板平均数； 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数； 平皿内如有菌落之间无明显界线，可视为一个菌落数；;②菌落总数计算方法 若只有一个稀释度菌落在适宜计数范围内，计算平均值*稀释倍数作为结果；若两个连续稀释度的菌落都在适宜计数范围内时按公式计算： ; 若所有稀释度平均菌落数均300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分300或30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。;③菌落数的报告 菌落数100内时，按四舍五入修约，以整数报告，≥100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，第三位数以四舍五入方法修约；取前两位数字，后面用0代替，也可用10的指数表示； 若平板上为蔓延菌落无法计数，则报告菌落蔓延； 若空白上长菌，则实验失败； 称重以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/ml为单位报告。;2食品中大肠菌群的测定;国标法;;;;