基因工程-绪论PPT.ppt

基 因 工 程;绪 论;极端嗜热菌：能生长在90℃以上的高温环境，是生物界耐受高温的冠军。 极端嗜盐菌：生活在高盐度环境中，盐度可达25%，如死海和盐湖中，它们通过其细胞膜上光驱动的质子泵，产生质子动力势，合成ATP。 极端嗜酸菌：能生活在pH值1以下的环境中，往往也是嗜高温菌，生活在火山地区的酸性热水中，能氧化硫，硫酸作为代谢产物排出体外。 极端嗜碱菌：多数生活在盐碱湖或碱湖、碱池中，生活环境pH值可达11.5以上，最适pH值8-10。;自然发生的变异是非常缓慢的。 随着生物技术的发展，人们开始学会干预生物的变异。 20世纪70年代，基因工程学诞生：以重组DNA技术，短时间内改造生物的遗传特性。;一、基因工程的诞生;科学发展历程;2、技术上的三大发明 限制性核酸内切酶的发现 基因工程的可能性： 理论上 困难：庞大的dsDNA，不能获得 单个的基因片段。;1970年 美国约翰·霍布金斯大学 H.Smith 偶然发现: 流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae） 能迅速降解外源的噬菌体DNA， 无细胞提取液可降解E.coli DNA，但不能降解自身DNA ，即HindII酶; 1972年 Boyer实验室; DNA连接酶的发现 1967年，世界上有5个实验室几乎同时发现了DNA连接酶。 DNA连接酶能够参与DNA缺口的修复。 1970年，美国Khorana实验室，发现 T4 DNA连接酶，具有更高的连接活性。; 基因工程载体的发现 有了对 DNA 切割与连接的工具酶，还不能完成 DNA体外重组的工作 大多数DNA片段不具备自我复制的能力，必须将DNA片段连接到一种特定的、具有自我复制能力的 DNA 分子上。 ——载体（Vector）; 载体的研究先于限制性核酸内切酶。 1946年，Lederberg 开始研究细菌的性因子——F因子 50和60年代，相继发现其它质粒， 抗药性因子（R因子） 大肠杆菌素因子（CoE因子） 1973年，Cohen 将质粒作为基因工程 的载体使用。; 1972年， 美国斯坦福大学 P. Berg 研究小组 使用限制性内切酶 EcoRI，在体外对猿猴病毒SV40和 λDNA 分别进行酶切，然后再用T4 DNA 连接酶连???，获得了杂种 DNA分子。 ——第一次成功实现DNA体外重组 ; 1973年， 美国斯坦福大学 S. cohen 等人，也成功的进行了另一个体外重组实验并实现了细菌间性状的转移。 ——基因工程发展史上第一次实现重组体转化成功的例子。;（一）定义： 大多数西方国家对此都有一个精确的法律定义，（由于政府对之的法律约束），一般说来，将基因工程定义为： 将在细胞外产生的核酸分子插入病毒, 质粒或其它载体系统中，再整合到那些本来不含该类物质的宿主中，从而形成一种新的可连续繁殖的有机体。; 强调 外源核酸分子(一般为DNA)在不同宿主中的繁殖；打破自然种的界限；将来自不相关物种的基因放入一个宿主中。;相关的名称： 遗传工程（Genetic engineering) 基因操作（Gene manipulation) 重组 DNA 技术（Recombinant DNA technique) 分子克隆（Molecular cloning) 基因克隆（Gene cloning); 遗传工程 比基因工程有更广泛的内容，凡是人工改造生物遗传性的技术如物理化学诱变、细胞融合、花粉培育、常规育种、有性杂交等，还包括基因工程在内。 遗传工程包括基因工程。 遗传工程不等于基因工程。; 重组 DNA技术 基因工程的核心内容。 严格地说，基因工程除上述定义所阐明的内容外，还包括体外 DNA 突变、体内基因操作以及基因的化学合成等。 重组DNA技术不等于基因工程。; 克隆（Clone） 当作名词使用时，是指从一个共同祖先无性繁殖下来的一群遗传上同一的 DNA 分子、细