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设40000rpm时 R1最小、 3.8cm R2平均、 5.9cm R3最大、 8.1cm RCF值分别 67,910g 105,400g 144,700g   ? The End 固定角式转子 角式转子的特点： （1）重心低,转速可较高 （2）样品粒子穿过溶剂层的距离略大于 离心管 的直径;  （3）“管壁效应” ： 有一定的角度, 在离心过程中撞到 离心管外壁的粒子沿着管壁滑到管底形 成沉淀, 此效应使最后在管底聚成的沉 淀较紧密。 R1 R2 R3 在离心管的不同部位距旋转中心轴的距离也不同,那么在一定的转速下其RCF值也各不相同 2.水平转子 （1）转子静止时,处在转子中的离心管中 心线与旋转轴平行,（2）转子旋转加速时,离心管中心线由  行位置逐渐过渡到垂直位置,即与旋 转轴成90°角,（3）粒子的沉淀方向同旋转半径方向基本 一致有少量的“管壁效应” 水平转子的特点：（1）转子的重心位置较高 （2）样品粒子沉降穿过溶剂层的距离大于 直径（3）对于多种成分样品分离特别有效 （4）常用于速率区带离心和等密度离心 3.垂直转子  离心管垂直插入转子孔内,在离心过程中始终与旋转轴平行,而离心时液层发生90°角的变化,从开始的水平方向改成垂直方向,当转子降速时,垂直分布的液层又逐渐趋向水平,待旋转停止后,液面又完全恢复成水平方向。 三.离心分离方法  根据离心原理,按照实际工作的需要，目前已有可设计出各种离心方法综合起来大致可分三类 离心分离法 差速离心法 沉降速度法 速率区带离心法 等密度离心法 沉降平衡法 经典式沉降法 1.平衡离心法 根据粒子大小、形状不同进行分离。差速离心法(differential velocity  centrifugation)速率区带离心法(rate zonal centrifugation)。 2.等密度离心法(isopynic centrifugation)  又称等比重离心法,依粒子密度差进行分离,等密度离心法和上述速率区带离心法合称为密度梯度离心法。 3.经典式沉降平衡离心法 用于对生物大分子分子量的测定、纯度估计、构象变化。? (一).差速离心法1、原理  利用不同的粒子在离心力场中沉降的差别,在同一离心条件下,沉降速度不同,通过不断增加相对离心力,使一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子分部沉淀。  操作过程中一般是在离心后倾倒的办法把上清液与沉淀分开,然后将上清液加高转速离心,分离出第二部分沉淀,如此往复加高转速,逐级分离出所需要的物质。 差速离心的分辨率不高,沉淀系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开,常用于其他分离手段之前的粗制品提取。 2.注意点：可用角式、水平式转头可用刹车难以获得高纯度 ? 例用差速离心法分离已破碎的细胞各组份 已破碎的细胞 500g,10分钟   沉淀 上清液 (细胞核） 10,000g,10分钟  沉淀 上清液 (细胞膜碎片,线粒体,) 100,000g,3小时 溶酶体   沉淀 上清液 (核糖核蛋白体） (可溶性成份)? (二).速率区带离心法1.原理  离心前离心管内先装入密度梯度介质,待分离的样品铺在梯度液的顶部、离心管底部或梯度层中间,同梯度液一起离心。离心后在近旋转轴处(X1)的介质密度最小,离旋转轴最远处(X2)介质的密度最大,但最大介质密度必须小于样品中粒子的最小密度,即ρpρm。这种方法是根据分离的粒子其在梯度液中沉降速度的不同,使