点亮你紫激光流式多色技术和紫激光染料应用.PDFVIP

点亮你的紫激光|流式多色技术和紫激光染料应用 一、流式多色技术的曙光——405nm 紫激光器的出现 1973 年BD 与美国斯坦福大学合作研发了第一台商品化的流式细 胞仪之后，流式技术的应用得到了不断的推广，促进了科研工作者 研究的深度和广度。但上世纪流式技术的发展受限于激光器以及染 料的发展，大多数研究都停留在6 色以下。这种状况直到本世纪初才 得到解决，以这篇文章为分水岭，流式技术超越了6 色的界限，向着 更深更广在发展。 文章中采用BD FACS 系列流式细胞仪，将常用的6 色流式检测提 高到了 12 色的流式多色分析技术，这在当时是一次非常大的提高。 其中，紫色激光器帮助研究者突破了10 色的界限，达到了12 色的新 高度，自此之后流式多色技术蓬勃发展。为什么流式多色技术达到 12 色后如此引人注目？正是因为这项尝试带来了巨大优势和潜力。 流式多色技术具有非常突出的优势： 1、流式细胞群体的分析更加精准可靠； 2、细胞功能表征分析落于单细胞层面； 3、稀有细胞的信息更加详细真实； 4 、微量样品数据信息的大大提高； 5、提高细胞亚群分辨的识别精度； 紫激光以及染料的发展对于流式多色技术的进步具有至关重要 的意义，在流式多色技术发展中有个非常著名的Roederer 规律： 流式细胞技术的颜色数量每九年翻倍一次 通过图中可以看到，自2000 年以后，随着紫激光的应用，流式 技术的色彩数量呈几何级增加，大大丰富了研究者的选择，提高了 流式技术对于科学研究的帮助，增加了研究的深度和广度。 市场上常见的可配备405nm 紫激光的流式细胞仪： 二、丰富的应用选择——405nm 紫激光器的优势与应用 紫色激光是流式技术由6 色以下发展到8 色和10 色的关键激光， 其激发的紫色荧光素能够很好的与红色和蓝色激光共同使用，荧光信 号强，荧光干扰少，染料种类丰富。新型激光器的应用给科研工作者 提供了更丰富的配色选择，大大提高了科研研究的深度和广度，为发 现新的成果奠定基础。 405nm 紫激光器与经典的红蓝色激光形成空间立体激发，大大 减弱彼此之间的干扰，从而更好的使得紫激光器匹配的染料与传统 的染料组合进行搭配，增加紫激光匹配的染料与应用范围： （1）新型Brilliant Violet 系列染料： BV421、BV510 、BV605、BV650、BV711 、BV786 系列染料具有荧光 亮度更高，荧光补偿更少，激发效率更稳定的特点，因而特别适合 于分辨弱表达细胞群体。Brilliant Violet Dye 与抗原低密度的标志物特 异性抗体偶联制成的流式荧光抗体，具有更高的分辨力，比传统 Pacific Blue™染料亮度高10 倍以上，适合肿瘤靶细胞的标记。 2000 年，诺贝尔化学奖被授予一种革命性的导电聚合物材料，该 聚合物染料光稳定性非常高，可以有效地收集激发光波并高效率将其 传递为更长波长的发射光，从而拥有更加优异的检测灵敏度。Brilliant Violet 系列染料就是基于诺贝尔化学奖原理而设计，具有明亮、不易 淬灭以及发射光谱窄等特点，大大丰富流式细胞技术在蓝紫波段染料 种类，拓展流式技术的应用范围。 BD Horizon Brilliant 是光学片段的聚合物链，聚合物链中的每个链段都能够独立 吸收光子，因而可以具有非常大的消光系数（或吸收光子的概率）。独立链吸收光子 后，在电离子域的作用下，能量延链通过荧光共振能量偏转传送后发光，大大提高光信 号亮度和效率。 荧光染料亮度分级表 Brilliant Violet 系列染料相对于传统染料具有更强的荧光信号以及 更好的稳定性，采用此系列流式抗体进行细胞染色鉴定时，将获得更 加优异的分辨能力，从而帮助科学家非常容易的寻找到感兴趣的细胞 群体。 VS FITC-CD4 BV421-CD4 PerCP-Cy™5.5