第一章 基因与基因工程-2PPT.ppt

第一章 基因与基因工程;基因的现代概念;转座因子，指染色体组上可以转移的基因。 实质：能够转移位置的DNA片断。 功能：在同一染色体内或不同染色体之间移动 ?????引起插入突变、DNA结构变异（如重复、缺失、畸变） ?????通过表现型变异得到鉴别。 遗传工程：转座子标签法。 ;插入序列，具有一个控制转位作用的转位酶基因，通常被反向重复序列所包围 复合的转位子Tn1681,具有2个插入序列（ IS1 ）和一个热稳定大肠杆菌毒素1基因;;1．复制转座(replicative transposition) 转座因子在转座期间先复制一份拷贝，而后拷贝转座到新的位置，在原先的位置上仍然保留原来的转座因子。复制转座有转座酶(transposase)和解离酶(resolvase)的参与。转座酶作用于原来的转座因子的末端，解离酶则作用于复制的拷贝。TnA是复制转座的例子。  2．非复制转座(non-replicative transposition) 转座因子直接从原来位置上转座插入新的位置，并留在插入位置上，这种转座只需转座酶的作用。非复制转座的结果是在原来的位置上丢失了转座因子，而在插入位置上增加了转座因子。这可造成表型的变化。  3. 保留转座(conservative transposition)也是非复制转座的一种类型。其特点是转座因子的切离和插人类似于入噬菌体的整合作用，所用的转座酶也是属于入整合酶(integrase)家族。出现这种转座的转座因子都比较大，而且转座的往往不只是转座因子自身，而是连同宿主的一部分DNA一起转座。 非复制转座可以是直接从供体分子的转座子两端产生双链断裂，使整个转座子释放出来，然后在受体分子上产生的交错接口处插入，这是“切割与黏接”(“cut and paste)的方式。另一种方式是在转座子分子同受体分子之间形成一种交换结构(crossover structure)，受体分子上产生交错的单链缺口，与酶切后产生的转座子单链游离末端连接，并在插入位点上产生正向重复序列；最 后，由此生成的交换结构经产生缺口(nick)而使转座子转座在受体分子。供体DNA分子上留下双链断裂，结果 或是供体分子被降解，或是被DNA修复系统识别而得到修复。 ;（4）逆转位子;2、断裂基因（ split gene）;2.2.1 基因及其产物的共线性 基因决定蛋白质的序列组成，是由密码子对应特定氨基酸所决定的。当一个基因的核苷酸序列与其产物的氨基酸序列是一一对应时，则表明它们是共线性的。 2.2.2 基因及其产物的非共线性 由于真核生物的断裂基因具有内含子，使得一个基因的核苷酸序列与其产物的氨基酸序列不是一一对应关系，则表明基因及其产物是非共线性的。 ;2.4 内含子及外显子的一般特点;2.6 断裂基因的意义 ①有利于储存较多的信息，增加信息量：一般说，一个基因只转录出一种mRNA，但是一些断裂基因以不同的剪接方式可以产生两种以至多种mRNA，于是编码不同功能的多肽。 ②有利于变异和进化：虽然单个碱基的改变有时可以引起氨基酸的变更而造成蛋白质的变化，但是很难产生重大改变而形成新的蛋白质。更何况如这些单个碱基突变发生在密码子第三位上往往是沉默的，于是大大地降低了突变的效应。而在断裂基因中如果突变发生在内含子与外显子结合部位，那么就会造成剪接方式的改变，结果使蛋白质结构发生大幅度的变化，从而加速进化。 ③增加重组机率：内含子有可能不断地增减造成新的剪接方式，一方面形成新的基因，另一方面在剪接过程中无疑地会增加重组频率；同时在断裂基因中，由于内含子的存在，基因长度增加，于是也增加了重组频率。 ④可能是基因调控装置：内含子可能在基因表达中有一定的调控作用，在基因转录水平上以及在合成了mRNA以后的加工过程中起着调控基因表达的作用。;3、假基因（Pseudogenes）;4、重复序列及重复基因;（1）唯一或低度重复序列： 基因组中只有一个拷贝的序列。 在人类基因组中，单一序列绝大多数编码蛋白质或者酶的结构基因。 低度重复： 是指在基因组中含有2-10个拷贝的序列，如酵母tRNA基因、人和小鼠的珠蛋白基因等。 （2）中度重复序列 指在基因组中有10个以上直至几千个拷贝的长约300bp的序列，如rRNA和tRNA基因。 （3）高度重复序列 是指在基因组中拷贝数可多达十万次的一种简单的重复序列，有的重复单位长度不超过6bp。 卫星DNA(satellite DNA)：当将该DNA切成片段进行氯化铯密度梯度超速离心时，由于其富含A-T片段的浮力密度小，在离心管中常常单独形成一条较窄的带，在主体D