HPLC法测定祛风止痛浓缩丸中没食子酸含量.docVIP

HPLC法测定祛风止痛浓缩丸中没食子酸含量 　　【摘要】 目的 建立祛风止痛浓缩丸中没食子酸的含量测定方法。方法 采用HPLC法测定其中没食子酸的含量。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.025mol/L磷酸（用三乙胺调pH2.7）（5：95）为流动相；检测波长为266nm。结果 在选定的色谱条件下，供试液中没食子酸与相邻组分离度良好，阴性液没有干扰，方法的稳定性、重现性、精密度、回收率试验（RSD%=1.8%，n=6）均符合相关规定，三批样品中每丸含没食子酸分别为4.21mg、4.45mg和3.96mg。结论 采用HPLC法可以作为祛风止痛浓缩丸中没食子酸的含量测定方法。 　　【关键词】 祛风止痛浓缩丸；没食子酸；HPLC 　　doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.731 文章编号：1004-7484（2012）-08-3009-02 　　祛风止痛浓缩丸是在祛风止痛片的基础上，经型剂改革制备而成。本制剂由老鹳草、槲寄生等7味中药经加工制成。具有祛风止痛、散寒除湿、强壮筋骨之功能。用于风寒湿痹、关节疼痛、四肢麻木、腰膝酸软。[1]老鹳草为主药，拟以老鹳草中没食子酸为制剂定量指标，定量方法为HPLC法。 　　1 仪器和试剂 　　1.1 仪器 岛津LC-10AT液相色谱仪，SPD-10AV检测器。 　　1.2 试剂 除甲醇为色谱纯外，其余试剂都为分析纯。 　　2 实验方法 　　2.1 系统适用性与色谱条件试验 填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇-0.025mol/L磷酸（用三乙胺调pH2.7）（5：95）；理论塔板数以没食子酸计算不应低于4000。在266nm紫外波长下检测；相邻成分色谱峰与没食子酸的分离度应大于1.5。 　　2.2 对照品试液的配备 没食子酸对照品在105℃干燥至恒重后精密称取10mg，放置到100ml容量瓶中，用甲醇试剂溶解，稀释至刻度线摇匀制成每1ml含0.1mg的试液，制成没食子酸对照品液。 　　2.3 供试品试液的制备 精密称定研细的供试品1.0g，置具塞锥形瓶内，精密加甲醇试剂100ml称重，超声提取30分钟，放冷后再称重，加甲醇至原重摇匀，过滤取滤液，制成供试品溶液。 　　2.4 测定法 精密吸取对照品试液5μl与供试品试液10μl，注入色谱仪中，测定色谱峰面积，计算后即得结果。 　　2.5 测定波长的确立 适量取没食子酸对照品，加甲醇试剂溶解并制成每1ml含10μg的溶液，测定紫外吸收，在266nm紫外波长下有最大吸收，所以确定检测波长为266nm。 　　2.6 阴性干扰试验 取不含老鹳草的其它六味药材，依照供试品试液制备方法制成阴性液。精密吸取供试品试液、阴性液和对照品试液各5μl，注入色谱仪中，绘制色谱图，由色谱图提示，在对照品试液色谱相应的位置上，供试品试液具有相同保留时间的色谱峰，阴性试液在此位无吸收峰，此方法专属性强，对供试品中没食子酸的含量测定没有干扰。 　　2.7 对照品纯度检查 对照品没食子酸（批号110831-9501），为含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供，经用归一化法液相色谱法测定，含量大于98%。 　　2.8 线性范围考察 精称没食子酸对照品9.35mg，放入100ml量瓶中，加甲醇试剂溶解，稀释至刻度摇匀，制成每1ml含0.0935mg的对照品溶液，精密吸取2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μl注入色谱仪中，测定色谱峰面积。对照品进量（μg）依次为0.1870、0.3740、0.5610、0.7480、0.9350；色谱峰面积依次为262256、541990、819282、1090789、1376037。横坐标为进样量，纵坐标为色谱峰面积，绘制标准曲线，经线性回归，回归方程为：Y=1484685X-14837.5，r=0.9999。由检测结果得知，没食子酸进样量在0.1870μg-0.9350μg范围内线性关系较好。 　　2.9 稳定性试验考察 取供试品（批号030201），制成供试液。精密吸取供试液10μl，分别按0、2、4、6、8、10小时时间间隔，进样分析，测定色谱峰面积。色谱峰面积依次为565088、578799、556013、564576、565685、552652。χ 为563802.2，RSD%为1.7。由测定结果提示：供试品液配备后10小时内测定，没食子酸色谱峰的峰面积没有明显改变，因此在此时间内，供试品液化学性质比较恒定。 　　2.10 精密度试验考察 精密吸取同一供试品液5μL（批号030201），6次连续进样，测定色谱峰面积，测定结果色谱峰面积依次为565088、552485、578799、565858、557542、554845， χ为562436，RSD