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泥炭水解液培养米曲霉研究 　　摘要：本实验研究了泥炭水解液对米曲霉沪酿3.042的孢子生长速度以及种曲蛋白酶活性和成曲蛋白酶活性的影响。 　　关键词：泥炭酸（水）解液——peat水解液 生长速率——The rate of growth 蛋白酶酶活——The activity of protein 　　1 概述 　　泥炭是不完全分解的植物残体堆积物。因为它是不完全分解产物的堆积物。其成份相当复杂：水、纤维素、半纤维素、腐殖酸、石蜡，还有少量游离的氨基酸与金属离子。通过不同的酸，不同浓度的酸进行酸解，所得的泥炭水解液的成份及其组成含量均不尽相同，即使是用同一种酸、同种浓度，也会因为处理时间与处理的程序不同，泥炭水解液的成份及含量也有所差异。 　　对于泥炭的开发利用，在国外，是作为发酵工业基质原料来培养微生物，目前主要限于酵母菌和食用菌的某些种属；在国内，早些时候，对泥炭的开发与利用，主要是将之作为一种建筑材料加以利用；目前，也曾有报道：泥炭水解液作为一些食用菌的发酵底物、热带假丝酵母生产单细胞蛋白（scp）。在这些对于泥炭的开发利用中，泥炭水解液是作为碳源，将之添加到培养基质中去的，且结果有一定程度的增产作用。我们观察了泥炭水解液对米曲霉孢子发芽率、生长速率以及蛋白酶酶活的影响，现将结果报道如下： 　　2 材料与方法 　　2.1 菌种：沪酿3.042米曲霉，安徽大学生命科学院菌种室提供。 　　2.2 泥炭：采自安徽省繁昌县。 　　2.3 培养基 　　2.3.1 （斜面）培养基：参照《发酵调味品生产技术》（上册）。 　　2.3.2 三角瓶种曲培养基：豆饼：麸皮=20：80，含水量与干料100%。 　　2.3.3 成曲培养基：同2.3.1——麸曲培养基：10豆饼/1麸皮。 　　2.4 泥炭水解液制备：参考A.M.Martin等人的方法。 　　2.5 细胞培养：二次活化，再低浓度梯度，peat水解液培养训化，最后三角瓶扩大，成曲制备等实验。 　　2.6 试验方法 　　本实验按泥炭水解液含量分6个试验组种曲，成曲培养基中泥炭水解液含量分别为：0%、10%、15%、20%、25%、30%。 　　2.6.1 种曲接种：取7支经训化阶段的30%度管菌种，再支加无菌水3ml，轻划后倒入无菌玻璃珠三角瓶制成孢基液，以接种量为1ml/支（三角瓶）接种到含peat水解液的试验组；取3支同样阶段的对照试管菌种，重复上述步骤，以相同接种量接种至对照组。29-31℃培养，18.5h第一次翻曲，24h第二次翻曲，再培养2天即可。 　　2.6.2 成曲接种：分别取对照，30%的种曲5g于无菌水+玻珠的三角瓶内制成孢基液，对应接种，接种量为1ml/支（三角瓶）30-25℃培养，11.5h第一次翻曲，18h第二次翻曲，27h成曲成熟。 　　2.6.3 种曲蛋白酶活测定时的接种量同2.6.2，30-35℃培养，18h第一次翻曲，24.5h第二次翻曲，继续培养至66h即可。 　　2.6.4 酶活测定：参照Folin法测蛋白酶活，在40℃下，每分钟水解絡蛋白产生1mg絡氨酸，定义为1个蛋白酶活力单位。 　　蛋白酶活力单位=A/10×4N 　　其中A为样品测得的OD值，查标准曲线得到的酷氨酸的微克数。 　　10克为反应时间是10分钟。 　　4为4ml反应液中取1ml测来（即4倍）。 　　N为酶液稀释倍数。 　　3 结果与讨论 　　3.1 peat水解液对沪酿3.042生长速度影响： 　　注：表1中长度指的是孢子平面向下延伸的长度。 　　从表1可看出随时间的延长，孢子平面向下加快延伸，但后一阶段增长百分比一般比前一阶段增长百分值低，这与越向下，培养基通气情况越差有关；随peat水解液含量的增加，延长速率也加快，说明peat水解液对3.042的生长速率有较明显的刺激作用。 　　3.2 peat水解液对3.042蛋白酶活性影响。 　　3.2.1 peat水解液对于3.042种曲蛋白酶活影响 　　种曲蛋白酶的多少虽与最后的发酵关系不大，但它活性大小可反映种曲的质量，也一定程度上反映出种曲的孢子数多少；考虑种曲中提取高活性的蛋白酶用于后期发酵，以缩短发酵周期，改善酱油风味等方面提供一条思路。 　　从表2可看出此种种曲蛋白酶（中性）酶活多数在2-3×103单位之间，且随peat水解液浓度的升高，蛋白酶活性亦随之增加，说明peat水解液对种曲蛋白酶活有一定程度上的刺激作用。 　　3.2.2 peat水解液对沪酿3.042成曲蛋白酶活影响 　　成曲蛋白酶活性大小，是酱油酿造中成曲质量高低的一个重要指标；同时成曲酶活也将直接影响后期发酵周期长短，酱油质量的优劣、原料中N源利用率高低等许多方面。 　　从表3可以看出此种成曲蛋白酶活性多在1-2×103单位之间。近种曲酶活性的一半；随peat