15 核酸的物理化学性质-王镜岩生物化学(全)PPT.pptVIP

1、 核酸样品纯度和含量的鉴定 从A260／A280的比值即可判断样品的纯度。 纯DNA的A260／A280应大于1.8， 纯RNA的A260／A280应达到2.0 对于纯的样品，只要读出260nm的A值即可算出含量。 通常以1A=50ug／mL双螺旋DNA =40ug／mL单链DNA(或RNA)， =20ug／mL寡核苷酸 当C=50ug／mL时： 双螺旋DNA的 A260=1.00 单链DNA(或RNA)的 A260=1.37 寡核苷酸的 A260=1.60 这是因为双螺旋结构使碱基对的π电子云发生重叠，因而减少了对紫外光的吸收） 对于不纯的核酸可以用琼脂糖凝胶电泳分离出区带后，经溴化乙锭(EB)染色在紫外灯下粗略地估计其含量。 有时核酸溶液的紫外吸收以摩尔磷吸光系数来表示： ε(P)=A/c l  一般天然DNA的ε(P)为6 600，RNA为7 700—7 800。单链多核苷酸的ε(P)值比双螺旋结构多核苷酸的ε(P)值要高。 核酸发生变性时，ε(P)值升高，此现象称为增色效应。（这是因为双螺旋结构使碱基对的π电子云发生重叠，因而减少了对紫外光的吸收） 复性后ε(P)值又降低，这现象称减色效应。 测定核酸的ε(P)可判断DNA制剂是否发生变性或降解。 第四节