5酵母基因工程(正)PPT.ppt

E 酵母菌的表达系统;A 酵母菌作为表达外源基因受体菌的特征;酵母菌表达外源基因的优势;B 酵母菌的宿主系统;提高重组蛋白表达产率的突变宿主菌;抑制超糖基化作用的突变宿主菌;1. 泛素介导的蛋白质降解作用;2. 酵母菌泛素依赖型蛋白降解系统的编码基因;3. 泛素降解途径衰减的酿酒酵母;C 酵母菌的载体系统;1. 酿酒酵母中的2m环状质粒;2. 乳酸克鲁维酵母中的线状质粒;酵母菌克隆表达质粒的构建;酵母菌质粒载体的种类：;1. 含有ARS的YRp质粒及含有2m Ori的YEP质粒的构建; 上述两类质粒转化效率较高（103-4转化子/ugDNA ），但转化子不稳定。虽然在酿酒酵母中拷贝数最高可达200个，但培养几代后，质粒的丢失率高达50%-70%，主要是由于分配不均匀所致。;2. 含有CEN的YCp质粒的构建;3. 含有TEL的YAC质粒的构建;4. 含有酵母菌染色体DNA同源序列的Ylp质粒的构建;同源重组的两种方式：单交换整合和双交换整合;D 酵母菌的转化系统;酵母菌的转化程序;2. 碱金属离子介导的酵母菌完整细胞的转化法;3. 酵母菌电击转化法;转化质粒在酵母细胞中的命运;用于转化子筛选的标记基因;i. 氨基糖苷磷酸转移酶基因（APH）显性选择;E 酵母菌的表达系统;酵母菌启动子的可控性;2. a – a 型启动子：;外源基因在酵母菌中表达的限制因素;酵母菌表达系统的选择;2. 巴斯德毕赤酵母表达系统;Gene of interest;（2）重组表达载体的转化;Gene of interest ;（4）整合转化子的筛选及目的基因的诱导表达; 巴斯德毕赤酵母表达系统的优势：;F 利用重组酵母生产乙肝疫苗;乙型肝炎病毒的结构与性质;大球形颗粒，小球形颗粒和管形颗粒 ;2. 乙型肝炎病毒的包装蛋白编码基因;产乙肝表面抗原的重组酿酒酵母;产乙肝表面抗原的重组巴斯德毕赤酵母;2. HBsAg基因的表达