5蛋白质翻译PPT.ppt

; ;　; ; 20种氨基酸作为原料 酶及蛋白因子，如IF、eIF等 ATP、GTP、无机离子;　;　;　;原核细胞mRNA的结构特点;真核细胞mRNA的结构特点; mRNA上存在遗传密码;ORF;2、遗传密码的破译 ;体外翻译系统;　; 每一个试管中的20种氨基酸只用14C标记一种氨基 酸，共用20个试管，结果发现用人工合成的多聚U 时得到的是多聚苯丙氨酸，说明苯丙氨酸的遗传密 码是UUU ;; 混合共聚物(mixed copolymers)实验对密码子中碱基组成的测定:按一定的碱基比例来合成RNA(1963年，Speyer和Ochoa等)。 碱基比为U:G＝5:1， 三联体8种：UUU，UUG，UGU，GUU，GGG，GGU，GUG，UGG。 UUU:UGG ＝（5′5′5）:（5′1′1）＝25:1 UUU:UUG＝5:1 根据这样的推测，在无细胞系统中以这种比例合成的mRNA产生的氨基酸的比例也应是相应的，这样可以推测出密码子的组成。如氨基酸测定结果： 苯丙氨酸（UUU）: 半胱氨酸（UGU）＝ 5:1 苯丙氨酸（UUU）: 缬氨酸? （GUU）＝ 5:1 ; 1964年，尼伦伯格发现蛋白质翻译过程中三个特点: 每一种氨基酸在酶作用下与自己对应的tRNA结合 tRNA能识别自己所携带的氨基酸的三联体密码 三联体密码都在核糖体上，翻译起始后形成一个复合体; ; ;;核苷酸结合技术;核苷酸结合技术;人工合成核苷酸(1965)（作为模板，加入dNTP,据合成的多肽链的氨基酸组成，破译氨基酸的密码）; 起始密码的确定： Nirenberg的三联体结合试验是在体外进行的试验， 合成时能从任何一个密码子开始，可以合成任意一 个氨基酸开头的多肽链。分不清哪个是起始密码子 1966年，剑桥分子研究中心A.J.Clark等发现在体内 进行合成的多肽链，其开头在细菌都为甲酰甲硫氨 酸，在真核生物都为甲硫氨酸，且都是从AUG这个 密码子开始，因此，把AUG定为起始密码子。; 终止密码子的推测： Nirenberg 、Khorana的试验都发现UAA、UAG、UGA 三个密码子不能代表任何的氨基酸。 1964Yanofsky 发现为E.coli编码trpA 的mRNA链还同时编码trpB、 trpC、trpD、trpE 四种多肽链，推测每条多肽链之 间可能有终止密码子。 1965年剑桥分子研究中心的Brenner,发现 E.coli一些无义突变型是在色氨酸位置上变化,由 UGG变成UGA，把UGA定为终止密码子 在酪氨酸位置上变化，由UAC 、UAU变成UAA、UAG， 所以把UAA、UAG码子也定为终止密码子 ;遗传密码表;The genetic code is the way in which the nucleotide sequence in nucleic acids specifies the amino acid sequence in proteins. It is a triplet code, where the codons (groups of the three nucleotides) are adjacent (nonoverlapping) and are not separated by punctuation (comma –less). Because many of the 64 codons specify the amino acid, the genetic code is degenerate (has redundancy). Until recently, the standard genetic code was considered universal: however, some deviations are now known to occur in mitochondria and some unicellular organisms.;(1)连续性（commaless） :两个密码子之间无任何核苷酸加以隔开和重叠，如插入/删除碱基，可发生移码突变或框移;遗传密码的特点;密码子简并性的生物学意义：减少有害突变。 遗传密码的特异性主要取决于前两位碱基。　 　　　GCU　　　　　　　 ACU 　　　GCC　　　　　　　 ACC 　　　GCA　　　　　　　 ACA 　　　GCG