【状元之路】2014高考生物(新课标通用版)一轮复习选3-1 专题一 基因工程PPT.ppt

[应用训练1]　(2012·新课标全国理综)根据基因工程的有关知识，回答下列问题。 (1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有________和________。 (2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下： AATT C……G G……CTTAA 为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是________。 (3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和________DNA连接酶。 (4)反转录作用的模板是________，产物是________。若要在体外获得大量反转录产物，常采用________技术。 (5)基因工程中除质粒外，________和________也可作为运载体。 (6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是___________。 [解析]　本题考查基因工程的操作过程及基因工程中的工具和工具酶的作用，考查考生的识记能力与理解分析能力，难度适中。限制性内切酶切割DNA分子形成的末端通常有两种，即黏性末端和平末端。为使运载体和目的基因连接，二者必须具有相同的黏性末端，因而当使用除EcoRⅠ之外的其他酶进行切割时，应该产生相同的黏性末端。 DNA连接酶的来源有两个：一是大肠杆菌，二是T4噬菌体。反转录是由RNA形成DNA的过程，获得大量反转录产物时常采用PCR扩增技术。基因工程常用的运载体是质粒，除此以外，噬菌体和动植物病毒也可作为运载体。如果用大肠杆菌作受体细胞，必须用钙离子处理，使其处于感受态(此状态吸收外源DNA的能力增强)。 [答案]　(1)黏性末端　平末端 (2)切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同 (3)E·coli　T4 (4)mRNA(或RNA)　cDNA(或DNA)　PCR (5)噬菌体　动植物病毒 (6)未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA)的能力极弱 (3)DNA复制、PCR技术与基因克隆： DNA复制主要在细胞内完成，是以DNA的两条链为模板，根据碱基互补配对原则合成两个完全相同的DNA分子的过程。复制的条件是：以DNA双链为模板，以四种脱氧核苷酸为原料，需要线粒体供能，还需要多种酶，如解旋酶、DNA聚合酶等。 PCR技术是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。它遵循的原理与DNA复制原理相同，条件是有一段已知目的基因的核苷酸序列和根据此核苷酸序列合成的引物；原料是四种脱氧核苷酸，也需要多种酶，如DNA聚合酶。在PCR扩增仪上自动复制。 基因克隆：用多种限制酶或者机械的方法，将某种生物的细胞DNA切成不同片段，并把所有片段随机地分别连接到用同种限制酶切过的基因载体上，然后分别转移到适当受体细胞如细菌中，通过细胞增殖而构成各个片段的无性繁殖系。 (4)PCR技术与DNA复制的比较： DNA复制 PCR技术 区别 场所 细胞内(主要是细胞核) 生物体外 酶 解旋酶、DNA聚合酶 热稳定DNA聚合酶 过程 边解旋边复制 受热变性→退火→延伸→多次重复 相同点 ①都是半保留复制方式 ②都遵循碱基互补配对原则 ③都需要酶、原料、引物、模板等条件 利用PCR技术获取目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物，引物是一小段DNA或RNA。 2．基因表达载体的构建——重组载体的构建 (1)表达载体的组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因。 (2)受体种类不同，所用的受体细胞种类也不相同。 植物：可以是卵细胞(或受精卵)、体细胞(可经组织培养成为完整个体)。 动物：受精卵(因为体细胞的全能性受到限制)。 (3)转化实质：目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。 特别提醒　在整个基因工程中，只有第三步将目的基因导入受体细胞过程中不发生碱基互补配对，其他步骤均发生。 四、抗虫棉的抗虫机理和培育过程 1．抗虫棉的抗虫机理 培育抗虫棉所用的基因来自苏云金芽孢杆菌。这种基因人工合成以后导入到棉花细胞内，使其在生长发育过程中合成一种毒蛋白，这种毒蛋白可以破坏害虫的消化系统，使取食棉花的棉铃虫中毒死亡，从而达到灭虫效果，提高棉花的抗虫性。 2．抗虫棉的培育过程 步骤 过程 基本原理 获得毒蛋白基因 用限制酶直接从苏云金芽孢杆菌DNA分子中剪取毒蛋白基因。或根据毒蛋白的氨基酸序列或其 mRNA人工合成毒蛋白基因 人工合成毒蛋白基因是根据氨基酸与 mRNA的对应关系，以及 mRNA与基因间的碱基互补关系 步骤 过程 基本原理 重组载体的构建 从细菌中提取符合要求的质粒，用同一种限制酶切取，用DNA连接酶将毒蛋白基因连接在质粒上，形成重组载体 用同一种限制酶切取的毒蛋白基因