专题1 1.2 基因工程的基本操作程序PPT.pptVIP

理解教材新知; 1．获取目的基因的常用方法有：从基因文库 中获取目的基因和利用PCR技术扩增目的基 因。 2．基因表达载体的构建是实施基因工程的 第二步，也是基因工程的核心。 3．一个基因表达载体的组成，除了目的基因 外，还必须有启动子、终止子以及标记基因等 。 4．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花 粉管通道法。 5．培育转基因动物时，受体细胞一般是受精卵，目的基因的导入方 法常用显微注射技术。 6．检测目的基因是否导入和转录，常用分子杂交技术；检测是否翻 译，常用抗原—抗体杂交技术。;(2)利用PCR技术扩增目的基因： ①原理： 。 ②前提条件：有一段已知目的基因的 ，以便根据 这一序列合成 。 ③条件：DNA模板、 、 和4种脱氧核苷酸。;④扩增过程：; 1．探讨基因文库、基因组文库、cDNA文库之间的关系。 提示：基因组文库含有一种生物的全部基因，而cDNA文库只含有一种生物的部分基因，二者都是基因文库。 2．从酶的角度分析PCR技术扩增DNA与DNA体内复制的不同点。 提示：①PCR技术扩增DNA不需要解旋酶；②PCR技术需要的DNA聚合酶应具有热稳定性。;[跟随名师·解疑难] 1．提取目的基因方法的比较;方 法;2．PCR技术与生物体内DNA复制的比较; [特别提醒] (1)基因工程操作中，只有使用受体生物自身基因的启动子才比较有利于基因的表达。 (2)通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体细胞中无法转录。 (3)热稳定DNA聚合酶(Taq聚合酶)能在高温下保持其活性，是PCR技术关键的工具之一。;[自读教材·夯基础] 1．基因表达载体的构建 (1)目的：使目的基因在受体细胞中 ，并且可以遗传和 。 (2)组成：; 2．将目的基因导入受体细胞 (1)导入植物细胞的方法：; (3)导入微生物细胞： ①原核生物特点： 、多为 、遗传物质相对 等。 ②方法：感受态细胞法，即用 处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态(这种细胞称为 )。; 1．思考基因表达载体的构建需要哪些工具酶。 提示：限制酶、DNA连接酶。 2．结合教材P13资料卡分析，用花粉管通道法导入受体细胞的目的基因是否需要和载体结合？试分析原因。 提示：需要。因为目的基因只有和载体结合成基因表达载体才容易在受体细胞中稳定维持和表达。 3．为什么动物的体细胞不能作为受体细胞？ 提示：动物体细胞全能性受到限制，不能发育为一个新个体。;[跟随名师·解疑难];2．将目的基因导入受体细胞的方法比较; [特别提醒] (1)完成基因表达载体的构建，需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶，连接产物有目的基因—目的基因，目的基因—运载体和运载体—运载体三种。 (2)将基因表达载体(重组质粒)导入农杆菌的常用方法是Ca2＋处理法。Ca2＋(或CaCl2溶液)对微生物细胞的作用是增加细胞壁的通透性。;[自读教材·夯基础] 1．分子水平的检测(连线); 1．检测棉花中导入的抗虫基因是否表达的最简便的方法是什么？ 提示：用叶片