分子遗传学-3PPT.ppt

3 DNA复制与基因表达;生物遗传物质的的传递和遗传信息的表达，实质上就是DNA的复制、转录和翻译过程，即DNA的自体催化和异体催化过程。DNA复制的忠实性、高效性是其遗传稳定性的保证。基因的表达则是储存在基因组的遗传信息在个体发育中表达为蛋白质及其它功能分子的过程。中心法则很好的反映基因的这种性质，这也是分子遗传学的核心内容之一。 ;原核生物和真核生物基因表达调控的不同 原核生物的基因多以操纵子为单位，转录和翻译是偶联的；真核生物的基因转录、RNA前体的加工、剪接在细胞核中进行，而翻译则在细胞质中进行 参与的有关酶和蛋白质的性质及机理也不尽相同。转录是基因表达关键的步骤之一，也是原核生物和真核生物基因表达的第一步。真核生物内含子的剪接和hnRNA加工机制十分复杂，可变剪接为一个基因产生多种蛋白质产物创造了可能。真核生物mRNA翻译后，其蛋白质产物可发生十分复杂的修饰和加工，例如，磷酸化、甲基化、乙酰化、糖基化、泛素化等。另外基因的表达还受到表观遗传现象的影响，例如组蛋白的修饰、染色体的重塑、DNA甲基化、RNA编辑等。;3.1 DNA的复制 3.1.1 DNA复制的一般特征 ⑴半保留和半不连续性 DNA的双螺旋模型就已预示着其复制的机理，即两条互补的DNA链均可以作为子链合成的模板，产生与亲代双链DNA完全相同的两条子链DNA分子。Meselson 和Stahl（1958）用重氮标记DNA，在复制后不同时间，经氯化铯密度梯度的离心实验证实了DNA复制的半保留性。Taylor（1957）用3H 标记DNA，通过蚕豆根尖的放射自显影实验，也证明了真核生物DNA的复制是半保留复制。 冈崎片段(Okazaki fragment)，DNA合成是不连续的，而是先合成多个小的DNA片段—冈崎片段(Okazaki fragment)，最后经DNA连接酶连接成长链DNA分子 ;⑵ DNA复制的起始位点 大量的证据表明，DNA的复制是从固定位置开始，在原核生物中仅有一个位点称为复制原点。在真核生物中，每条染色体有多个复制起始位点，复制起始位置有其特殊的序列结构。 复制起点有以下三个特征： ①有多个独特的短重复序列，但各种生物中该序列不尽相同。 ②该重复序列与多种启动复合蛋白结合，DNA聚合酶和其它复制蛋白在复制起点的正确组装就可启动DNA的复制。 ③复制起始位点序列富含AT碱基对，有利于DNA双螺旋的打开。DNA复制起点的性质决定了DNA复制发生的时期和方向。 ;⑶ DNA复制的引物 所有的DNA聚合酶在复制DNA时均需要3，-OH，并以碱基互补的原则合成DNA，即需要引物提供3，-OH才能进行聚合反应。引物一般为长10—12nt的RNA，是由引物酶（primase）以一条DNA为模板转录出一段小分子RNA。 ⑷ DNA复制的方向 从固定起始位点开始的DNA复制，可以是单向，也可以是双向的。两个复制叉的复制速度也可能不尽相同。两链可以同时复制，也可能其中一条链先复制，到一定程度后再复制另一条链。但绝大多数生物均采用双向等速复制。 ①滚环复制模型 ②D-环复制（单向不对称复制） ③θ环复制及多点双向等速复制 ;3.1.2 DNA复制的酶学与机理 ① DNA聚合酶（DNA polymerase） 为了高效忠实精确的进行DNA复制，DNA聚合酶在功能上也有许多分化和特化。在大肠杆菌中至少有5种DNA聚合酶，真核生物通常在15种以上。所有的DNA聚合酶均有5’-3’聚合功能，但不同的DNA聚合酶的聚合能力是不同的，在复制中起的主要作用也不同。 1958年Arthur Kornberg首先从大肠杆菌提取，DNA polⅠ 5` → 3`聚合作用 3` → 5`外切酶活性：校对功能 5` → 3`外切酶活性：引物切除、损伤修复 主要功能是切除引物，填补冈崎片段产生的空隙及DNA损伤的修复 切刻平移： 5` → 3`外切酶和聚合酶活性有关;大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ在37℃下每秒可合成1000nt，具有5’-3’外切和3’-5’外切酶活性，在RNA引物的去除和损伤修复中发挥重要作用。DNA聚合酶Ⅱ也有3’-5’，外切活性，但无5’-3’外切活性，而且其酶活性较低，聚合能力和速度较小，主要对错配、移码和链交叉修复起作用。DNA聚合酶Ⅲ的亚基成分最复杂，其全酶有10种不同的亚基组分（?、?、?、?、?、?、?、?′、?、?），是复制中起主要作用的酶，具有3’-5’，外切酶活性，但无5’-3’外切酶活性，因而不能发生链取代的切口平移反应（nick translation）， ; ② DNA连接酶（DNA ligase） 该酶依赖ATP或NAD，可将双链DNA上相邻的3’-OH和5’-磷酸末端连接在一起，从而形成完整的长链DNA分子。