生物制药课件-2-2PPT.ppt

（二）丙烯酸型离子交换树脂 丙烯酸型阳离子交换树脂：是由丙烯酸甲酯与二乙烯苯经过氧苯甲酰催化聚合而成。 丙烯酸型阳离子交换树脂 110树脂：丙烯酸甲酯与二乙烯苯聚合而成。 724树脂：它是由甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯和二乙烯苯三元共聚而得 。 （三）其它离子交换树脂 蛇笼树脂：脱盐 螯形树脂：金属离子 吸附树脂 ：“脱色树脂” 热再生离子交换树脂： 三、离子交换速度 R－B+ + A+ R－A+ + B+ 离子交换过程： 1、A+从溶液扩散到树脂表面。 2、A+从树脂颗粒表面扩散到颗粒中心。 3、平衡离子A+ 与离子B+交换。 4、B+从交换中心扩散到离子表面。 5、B+ 再扩散到溶液中。 离子交换速度的影响因素： 1、树脂粒度：树脂粒度大，交换速度慢。 2、搅拌速度 3、树脂交联度：交联度大，交换速度低。 4、离子半径和离子价：离子每增加一个电荷，交换速度下降一个数量级。 5、温度。 6、离子浓度：交换速度随离子浓度的上升而加快。 四、 离子交换树脂的性能 一）、离子交换对树脂的基本要求 二）、影响树脂性能的几个因素 一）、离子交换对树脂的基本要求： 1、有尽可能大的交换容量。 2、有良好的交换选择性。 3、化学性质稳定。 4、化学动力学性能好。 5、物理性能好。 二）、影响树脂性能的几个因素 1、离子交换树脂具有的功能基团性质和数目，数目是其交换容量的基础。 2、树脂的交联度——树脂强度、交换选择性、动力学性质。 3、树脂骨架和平衡离子。 六、离子交换操作方法 一）、?树脂的选择 目的物是弱酸性或弱碱性的小分子物质时，宜选用强酸强碱树脂（氨基酸的分离）。 蛋白质、酶和其它生物大分子的分离多采用弱碱或弱酸性树脂，减少生物大分子的变性，利于洗脱，提高选择性。 ? 二）、树脂的处理和再生 1、? 外观特征 透明或半透明；颗粒圆整，粒度均匀，强度。 2、? 树脂的预处理 （1）??物理处理：去杂，过筛。 （2） 化学处理：用8～10倍的1mol/L 盐酸或氢氧化钠溶液交替浸泡。 氨基酸分离前树脂的处理 树脂的再生 树脂再生：使用过的树脂重新获得使用性能的处理过程。 再生过程： （1）?去杂，大量水冲洗，除去物理吸附的杂质。 （2）?用酸、碱处理除去与功能基团结合的杂质。 (3) 转型： 三）、基本操作方法 交换：静态交换 动态交换 洗脱： 洗脱方式：分静态洗脱及动态洗脱两种，pH及离子强度改变。 洗脱液：酸、碱、盐。 酸、碱洗脱液：旨在改变吸附物的电荷或改变树脂吸附基团的解离状态，以消除静电结合力，迫使目的物被释放出来； 盐类洗脱液：是通过高浓度的同种电荷的离子与目的物竞争树脂上的活性基团，使吸附物解离。 洗脱方式 动态洗脱： 1、 溶液pH及离子强度不变。 2、分阶段改变溶液pH及离子强度。 3、连续改变溶液pH及离子强度。 梯度洗脱：自动化的梯度仪 梯度混合器: ?A瓶为低浓度盐溶液 B瓶为高浓度盐溶液 七、应用实例 分离纯化——氨基酸制备 无盐水制备 氨基酸制备、分离 猪血粉水解制备6种氨基酸: 阳离子交换树脂用强酸性树脂，阴离子交换树脂可以用强碱或弱碱树脂。 强酸——弱碱 或 强酸——强碱； 当对水质要求高时，经过一次组合脱盐，还达不到要求，可采用两次组合: 强酸——弱碱——强酸——强碱； 强酸——强碱混合床。 无盐水制备 无盐水制备是利用氢型阳离子交换树脂和羟型阴离子交换树脂的组合以除去水中所有的离子。 混合床－无盐水 图8.20 混合床的操作 (a)为水制备时的情形； (b)为制备结束，用水逆流冲洗。阳、阴树脂根据比重不同分层，一般阳树脂较重在下面，阴树脂在上面； (c)为上部、下部同时通入碱、酸再生，废液自中间排出； (d)为再生结束，通入空气，将阳、阴树脂混合、准备制水 混合床 混合床系将阳、阴两种树脂混合而成，脱盐效果好。 第六节 亲和纯化技术 利用生物分子间的特异性结合作用的原理进行生物物质分离纯化的技术称为亲和纯化技术（Affinity purification） 技术要点 （1）找与底物专一可逆结合的配基； （2）将配基通过共价键偶联到基质； （3）配基与底物吸附； （4）洗脱目标物。 亲和纯化技术 亲和层析(Affinity chromatography) 亲和过滤（膜分离） 亲和分配（双水相萃取） 亲和反胶团萃取（反胶团萃取） 亲和沉淀（沉淀） 亲和电泳（电泳） 琼脂糖凝胶分离范围 琼脂糖凝胶有3个规格：Sepharose2B、4B、6B分别表示琼脂糖浓度为2%，4%，6%。 （二）架桥琼脂糖凝胶（Sepharose CL） 架桥琼脂糖凝胶为琼脂线性