生化12 DNA生物合成PPT.ppt

基因信息的传递 ;复制;DNA的生物合成 (复制) DNA Biosynthesis，Replication ;复制(replication) 指遗传物质的传代，以亲代DNA为模板，dNTP (dATP dGTP dCTP dTTP)为原料，按碱基配对规律合成子代DNA的过程。;复制的基本规律 Basic Rules of DNA Replication ; 密度梯度实验 ; DNA半保留复制模型 ;按半保留复制方式，子代DNA与亲代DNA的碱基序列一致，即子代保留了亲代的全部遗传信息，体现了遗传的保守性。;原核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉(replication fork) 。 ;;A. 环状双链DNA及复制起始点 B. 复制中的两个复制叉 C. 复制接近终止点(termination, ter);5’;三、复制的半不连续性 (semi-discontinuous replication) ; 半不连续性 复制过程中，领头链连续复制，而随从链不连续复制的现象。 冈崎片段(okazaki fragment) 不连续复制的片段 ; DNA复制的酶学和拓扑学变化 The Enzymology and Topology of DNA Replication; 参与DNA复制的物质 ;一、复制的化学反应 ;全称：依赖DNA的DNA聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase, DDDP) 简称：DNA-pol;DNA-pol 的 5′?3′聚合作用;3′?5′外切;1. 原核生物的DNA聚合酶;功能：对复制中的错误进行校读，对复制和 修复中出现的空隙进行填补。;DNA-pol I 5′? 3′外切酶活性的功能;DNA-pol I 3′?5′外切酶活性的功能;323个氨基酸;DNA-pol Ⅱ（120kD）; 功能: 是原核生物复制延长中真正起催化作用的酶。 ;DNA-po l Ⅲ 同时合成领头链和随从链 ;2. 真核生物的DNA聚合酶;三、复制的保真性 (fidelity); DNA pol III 在催化磷酸二酯键形成之前完 成对碱基的选择；对反式嘌呤核苷酸的亲和 力较顺式的大。;3. DNA-pol的核酸外切酶活性和及时校读;解链酶类：;1. 解螺旋酶 (helicase);2. 单链DNA结合蛋白 (single stranded DNA-binding protein, SSB) ;3. 引物酶 (primase);4. DNA拓扑异构酶 (topoisomerase, Topo) ;10;解链过程中正超螺旋的形成; 拓扑异构酶作用特点 既能水解 、又能连接磷酸二酯键;切割DNA双链，此时不需ATP；尔后由ATP供能，使DNA分子成负超螺旋再连接切口。;五、DNA连接酶 (DNA ligase);HO; 在复制中起最后接合缺口的作用； 在DNA修复、重组及剪接中起缝合缺口作用； ???因工程的重要工具酶之一。; ;DNA生物合成过程 The Process of DNA Replication;（一）复制的起始 (initiation ) ; 由特定蛋白质识别复制起始位点(ori)，在解螺旋酶、TOPO酶及单链DNA结合蛋白的共同作用下，DNA解链，解旋，形成复制叉。;E.coli复制起始点 oriC;E.coli复制起始点 oriC; Dna A;5′;3?;（二）复制的延长 (elongation);dATP; 5;领头链的合成;;;阶段一;阶段三;1. 原核生物基因是环状DNA，双向复制的 汇合点就是复制的终止点。;5?;;真核生物每个染色体是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活。 复制的起始需要DNA-polα和polδ参与。还需拓扑酶和复制因子 (replication factor, RF)。 增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)在复制起始和延长中起关键作用。;领头链; 染色体DNA呈线状，复制在末端停止。 复制中岡崎片段的连接，复制子之间的 连接。 染色体两端DNA子链上最后复制的RNA 引物，去除后留下空隙。;5?;反转录和其他的复制方式 Reverse Transcription and Other DNA Replication Ways;反转录酶 (reverse transcriptase) ;;反转录病毒细胞内的