生物化学 第03章 酶 课件PPT.ppt

举例： ☆丙二酸与琥珀酸共同竞争琥珀酸脱氢酶： 琥珀酸 琥珀酸脱氢酶 FAD FADH2 延胡索酸 ☆磺胺类药物的抑菌机制： ——与对氨基苯甲酸共同竞争二氢叶酸合成酶 二氢蝶呤啶 ＋ 对氨基苯甲酸 ＋ 谷氨酸 二氢叶酸 合成酶 二氢叶酸 有些抑制剂与酶活性中心外的必需基团相结合，不影响酶与底物的结合，底物和抑制剂之间无竞争关系。但酶-底物-抑制剂复合物(ESI)不能进一步释放出产物。这种抑制作用称作非竞争性抑制作用。 非竞争性抑制作用： 定义： 反应模式 + S － S + S － S + ESI EI E ES E P E+S ES E+P + I EI+S EIS + I 特点： 1、抑制剂与酶活性中心外的必需基团结合，底物与抑制剂之间无竞争关系。 2、抑制程度取决于抑制剂的浓度。 3、动力学特点：Vmax降低，表观Km不变。 抑制剂↑ 1 / V 1/[S] 无抑制剂 抑制剂仅与酶-底物复合物ES结合，使ES的量下降，这样，既减少从中间产物转化为产物的量，也同时减少从中间产物解离出游离酶和底物的量。这种抑制作用称为反竞争性抑制作用。 定义： 反竞争性抑制作用： 第三节 酶促反应动力学 Enzyme Kinetics 酶促反应动力学：研究各种因素对酶促反应速率的影响，并加以定量的阐述。 影响因素包括：[E]、[S] 、pH、温度、抑制剂、激活剂等。 针对的是单底物、单产物反应 一、化学反应速度和酶促反应速度： 化学反应速度：是指在规定的反应条件下，用单位时间内底物的消耗量或产物的生成量来表示。 初速度：指底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速度。 初速度的测定是酶促反应动力学研究的基本。 在其他因素不变的情况下，[S]对反应速率的影响呈矩形双曲线型。 [S] V 二、底物浓度对酶促反应速度的影响： 当底物浓度较低时，占据的酶活性中心较少，反应速率与底物浓度成正比，反应为一级反应。 [S] V Vmax 随着底物浓度的增高，占据的酶活性中心越来越多，反应速率不再成正比例加速，反应为混合级反应。 [S] V Vmax 当底物浓度高达一定程度，酶活性中心完全占据，达到饱和，反应速率不再增加，达最大速率，反应为零级反应。 [S] V Vmax ES复合物，又称为中间产物 解释酶促反应中底物浓度和反应速率关系的最合理学说是中间产物学说： E + S k-1 k1 k2 ES E + P （一）酶的中间产物学说和酶反应速度方程： 1913年Michaelis和Menten提出反应速率与底物浓度关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程式 (Michaelis equation)。 [S]：底物浓度 V：不同[S]时的反应速率 Vmax：最大反应速率(maximum velocity) Ｋm：米氏常数(Michaelis constant) Ｖ Vmax[S] Km + [S] ＝ ── （三）米氏方程中动力学参数的意义： 1、Km值反映酶与底物的亲和力： 当反应速率为最大反应速率一半时： Km = [S] 2 = Km + [S] Vmax Vmax[S] Vmax V [S] Km Vmax/2 Km值的定义： 酶促反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度，单位是mol/L。 Km值越大，说明达到最大速度一半时所需的底物浓度也越大，因此表明酶与底物的亲和力越低；反之，Km值越小，酶与底物的亲和力越高。 1、Km是酶的特征性常数之一，只与酶的结构、底物和反应环境（如，温度、pH、离子强度）有关，与酶的浓度无关。 2、Km可近似表示酶对底物的亲和力。 3、同一酶对于不同底物有不同的Km值，不同的酶对同一底物有不同的Km值。 4、Km可判断酶的天然底物，在酶的底物中，Km最小的就是该酶的天然底物（最适底物）。 Km值的意义： 2、Vmax 定义：Vm是酶完全被底物饱和时的反应速率，即最大速率。 1、双倒数作图法（ 林-贝氏作图法）： Vmax[S] Km+[S] V = （林－贝氏方程） + 1/V= Km Vmax 1/Vmax 1/[S] 两边同取倒数 （四）酶动力学参数的测定： 1/[S] 1/V 斜率=Km/Vmax 1/Vmax -1/Km 纵轴上的截距为1/Vmax，横轴上的截距为-1/Km，通过作图，可得到这两个重要参数。 三、酶浓度对反应速率的影响： 在酶促反应系统中，当[S][E]使酶被底物饱和时，反应速率达最大速率。此时，反应速率和酶浓度变化呈正比关系。