生物工艺学第12章 菌种PPT.ppt

菌种的选育与保藏;1.1 菌种的来源;菌种：能产生所需产物并被选定用于发 酵生产的微生物 来源： 根据资料直接向有关科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买。 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 ;; 新的微生物菌种需要从自然生态环境中混 杂的微生物群中挑选出来，因此必须要有 快速而准确的新种分离和筛选方法。; ;1.1.1 微生物采样;1.1.2 材料的预处理;1.1.3 菌株的分离; 培养方法可采用分批式富集培养（摇瓶培养）和恒化富集培养（连续培养）。 分批式富集培养是将富集培养物转接到新的同一种培养基中，重新建立选择性压力，如此重复转种几次后，再取此富集培养物接种到固体培养基上，以获得单菌落。 恒化富集培养是通过改变限制性基质的浓度，来控制不同菌株的比生长速率。;总之，增殖培养的方式有下三种; 1.1.3.2 随机分离筛选法 一些微生物的产物对生产菌的筛选没有直接的选择性作用，常用随机分离法进行分离 (1) 抗生素生产菌的分离 将摇瓶培养的过滤液或细胞提取液、混合提取液： 用联合试验菌筛选：如黄色霉素抗生素就是用枯草杆菌和绿色链霉菌或巴氏梭状芽孢杆菌筛选出的。 利用与抗生素作用机制相关的酶筛选：如棒酸(β-内酰胺酶抑制剂)。;(2) 药理活性化合物的分离-体外筛选;抗HIV：HIV逆转录酶 （EC500.064 ug/ml） ;(3) 抗肿瘤药物产生菌的分离; 利用DNA修复能力突变株进行抗肿瘤药物的筛选： 在生物体中都存在两个以上的DNA修复基因，如果有一个DNA修复基因损伤或变异，通常仍能存活，但对能引起DNA损伤的化合物十分敏感，易导致死亡。如使用大肠杆菌或枯草芽孢杆菌的重组缺失DNA修复基因突变株和亲本株作为测试菌来筛选抗肿瘤药物。;(4) 抗病毒药物产生菌的分离;(5) 生长因子产生菌的分离;(6) 免疫激活剂产生菌的分离;(7) 多糖产生菌的分离;1.2 菌种的选育;选育方法： 自然选育 人工选育 ; 理想的工业发酵菌种应具备的条件： ????(1)遗传性状???定； ????(2)生长速度快，不易被噬菌体等污染； ????(3)目标产物的产量尽可能接近理论转化率； ????(4)目标产物最好能分泌到胞外，以降低产物抑制并利 于产物分离； ????(5)尽可能减少产物类似物的产量，以提高目标产物的产量及利于产物分离； ????(6)培养基成分简单、来源广、价格低廉； ????(7)对温度、pH、离子强度、剪切力等环境因素不敏感； ????(8)对溶氧的要求低，便于培养及降低能耗。 ;1.2.1 自然选育; 自发突变的频率较低，变异程度不大，育种过程十分缓慢。 自然选育在工业生产中可以达到纯化菌种，防止菌种衰退，稳定生产，提高产量的目的。;自然选育最为成功的例子： 目前被广泛使用的卡介苗(BCG vaccine)。 法国的卡尔密脱(Calmette)和介林(Guerin)把牛型的结核分枝杆菌接种在牛胆汁、甘油、马铃薯培养基上，连续传代培养230代，前后经历13年时间，在1923年获得显著减毒的结核杆菌----卡介苗。 ;1.2.2 诱变育种;诱变; 1.2.2.1 诱变剂和诱变处理; 紫外线诱变处理： UV波长一般选择在260nm。实际操作时紫外灯功率15W，距离30cm，被诱变材料（菌）的悬浮液进行适当时间的照射处理。;⑵ 化学诱变剂：指一些化学物质，如碱基类似物（如5-氟尿嘧啶）、氮芥、亚硝酸及一些烷化剂 等。 化学诱变剂中使用最多、最有效的是烷化剂及亚硝酸。 使用化学诱变剂的优缺点： 大多数情况下，就突变数量而言，要比电离辐射 更有效。 ;化学诱变剂是很经济的，因为只需要少量的合适的诱变剂，设备是实验室的一般玻璃器皿，一个蒸气罩。而用电离辐射进行工作时，设备费用大，并要注意安全性。 大部分诱变剂是致癌剂，所以在使用中必须非常谨慎，要避免化学诱变剂与皮肤接触，，且切勿吸入其蒸气，有人对某些诱变剂极其敏感，甚至未直接接触就会过敏，这就更要当心。 ; 氮芥诱变处理：将待处理菌（孢子）的悬浮液与氮芥盐酸盐溶液及Na