生物化学第6章 蛋白质的结构和功能-2PPT.ppt

Western blotting 蛋白质与配体结合的空间互补性——免疫球蛋白 免疫亲和层析（Immunoaffinity chromatography）是利用抗原和抗体所具有的专一亲和力而设计的层析技术。抗原和抗体在一定条件下能紧密结合成复合物，而这种结合又是可逆的，改变条件可将抗原抗体解离。当把抗原和抗体的一方(称配体)结合在惰性载体上使其固相化，另一方随流动相流经该载体，双方即结合为一整体。然后设法将它们解离，从而得到与配体有特异结合能力的某一特定的物质。 蛋白质与配体结合的空间互补性——免疫球蛋白 蛋白质与配体结合的空间互补性——免疫球蛋白 肌球蛋白与肌动蛋白 化学能对蛋白质相互作用的影响——肌球蛋白与肌动蛋白 第六章 蛋白质的结构和功能 主要内容 蛋白质与配体的可逆结合——肌红蛋白与血红蛋白 蛋白质与配体结合的空间互补性——免疫球蛋白 化学能对蛋白质相互作用的影响——肌球蛋白与肌动蛋白 肌红蛋白与血红蛋白 为什么Mb与Hb能结合氧？ 铁原子只有亚铁态的蛋白质才能结合氧。Mb或Hb蛋白质提供疏水洞穴，固定血红素基，保护血红素铁免遭氧化，为氧提供一个结合部位。结合氧只发生暂时电子重排。 Mb与Hb结构上的相同与不同之处是什么？ α链、β链和Mb的三级结构非常相似 只要功能相同（都与氧结合），高级结构就相似，有时甚至是唯一的。 Hb与Mb结构上最大不同在于血红蛋白有四级结构，是四聚体，，而肌红蛋白只有三级结构。 血红蛋白运载氧能力增强，还能运载H+和CO2，在氧分压变化不大范围内完成载氧和卸氧工作。且Hb为变构蛋白，可受环境中其他分子，如H+，CO2和2，3-二磷酸甘油酸（BPG）的调节。 协同效应与别构效应 氧与血红蛋白结合是协同进行的，具有正协同性同促效应，即一个氧分子与Hb结合，使同一Hb分子中其余空的氧结合部位对氧亲和力增加，再结合第二、三、四个氧分子则比较容易。 H+，CO2和BPG与Hb结合部位离血红素基甚远，是通过别构效应调节Hb与氧的结合。 pH降低（H+增加），CO2压力增加均降低血红蛋白对氧亲和力，促进血红蛋白释放氧；反之高浓度氧又促使脱氧血红蛋白释放H+和CO2。 （Bohr效应） BPG降低Hb对氧亲和力。 免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig） 蛋白质与配体结合的空间互补性——免疫球蛋白 1、免疫球蛋白是指具有抗体（antibody）活性，或化学结构与抗体相似的球蛋白。一般情况下，免疫球蛋白指的就是抗体。 2、抗体具有两个显著特点：高度的特异性和庞大的多样性。 蛋白质与配体结合的空间互补性——免疫球蛋白 一、基本概念 3、抗原(antigen, Ag)是一类能诱导免疫系统发生免疫应答，并能与免疫应答的产物(抗体或效应细胞)发生特异性结合的物质。抗原具有免疫原性和反应原性两种性质。 4、免疫原性是指抗原刺激机体后，机体免疫系统能形成抗体或致敏T淋巴细胞的特异性免疫反应。 5、反应原性是指产生的抗体或致敏T淋巴细胞能与抗原进行特异性结合的免疫反应。 蛋白质与配体结合的空间互补性——免疫球蛋白 6、既具免疫原性又具反应原性的抗原称免疫原。某种物质之所以能成为一个良好的免疫原，是因为它有特异的化学结构，这就是抗原决定簇。抗原决定簇可以与相应的淋巴细胞表面的受体蛋白结合引起免疫应答。一个抗原决定簇只能激活一种淋巴细胞(对于B细胞)只刺激产生一种类型抗体。一个抗原可以有一个或多个抗原决定簇。抗原决定簇少，抗体与抗原结合就少，往往就见不到反应。天然抗原或复杂的半抗原决定簇往往多达几十个，因此可以与很多抗体分子交互结合。 蛋白质与配体结合的空间互补性——免疫球蛋白 7、有些分子本身没有免疫原性，不能引起免疫反应，但是如果把它们和某些载体分子，如蛋白质分子结合起来就有了免疫原性，就能使动物对这一复合分子产生特异的抗体。这种本身无免疫原性，但有反应原性，一旦把它与载体结合就有了免疫原性的物质，就称半抗原或不完全抗原。 蛋白质与配体结合的空间互补性——免疫球蛋白 二、IgG的结构 IgG是呈Y型结构的球蛋白。 蛋白质与配体结合的空间互补性——免疫球蛋白 —轻链：25KD，214个氨基酸残基 —重链：50KD，450-570个氨基酸残基 蛋白质与配体结合的空间互补性——免疫球蛋白 根据组成多肽链的大小可分为轻链（Light chain, L）和重链（Heavy chain, H） 可变区 VL VH 恒定区 CH1, CH2, CH3 铰链区 根据L链和H链一级结构的序列同源性可分为可变区（Variable domain, V）和恒定区（Constant domain, C） 蛋白质与配体结合的空间互补性——免疫球蛋白 可变区又可进一步分为超变区（或称互补决定区）和骨架区