细胞周期调控蛋白的在茴香霉素抑制jurkatt细胞增殖中的作用初探.doc

细胞周期调控蛋白在茴香霉素抑制Jurkat T细胞增殖中的作用初探 P27 P-P27 P53 P-P53 P57 P73 P-P73 Rb P-Rb P-CDK1 和 P-CDK2 蛋白的表达水平选择这些蛋白 表达的高峰时间评价不同浓度茴 香霉素对它们表达的影响 筛选出因茴香霉素所致 Jurkat T 细胞增殖抑制和细胞 周期阻滞相一致且变化最为明显的 P21 和 P53 蛋白进一步通过 RT-PCR 测 定茴香霉素处理的 Jurkat T 细胞中 P21 mRNA 和 P53 mRNA 的水平以寻求佐证 结果 茴香霉素明显抑制 Jurkat T 细胞的集落形成和增殖 抑制率随浓度的增加 而增高茴香霉素能显著抑制细胞进入 S 期和 G2M 期DNA 亚二倍体随茴香 霉素浓度增加而显著增多ICBP90 蛋白表达在茴香霉素作用 12 h 开始 下降 并 且随茴香霉素浓度的变化而变化 呈明显负相关P21 蛋白的表达在茴香霉素处 理细胞 4 h 达到 最高 峰 之后 趋向 平稳 但仍 高于 对照 组 与茴 香霉 素浓 度呈 正相 关P21 蛋白表达上调较 P-P21 更为显著 P-P27 蛋白水平在茴香霉素处理细胞 4 h 开始 升高 并呈 明显 剂量 依赖 关系 P53 及其磷酸化蛋白的表达也在茴香霉素处 理细胞 4 h 达高峰至 24 h 仍然高于对照组 茴香霉素处理细胞后 Rb 及其磷酸 化蛋白的表达轻度升高 P-CDK2 的表达在 24 h 随药物浓度升高而降低呈明显 负相关而 P-CDK1 的表达则不受茴香霉素作用时间和作 用浓度的影响 P16 P57 和 P73 及其磷酸化蛋白表达无明显变化P21 mRNA 和 P53 mRNA 水平均 随茴香霉素刺激浓度的增加而增加 结论 茴香霉素可能主要通过激活 P53P21P27 途径 下调 ICBP90 的表 达 抑 制 P-CDK2 阻止 细胞 进 入 S 期和 G2M 期从而抑制 Jurkat T 细胞的增殖 关键词 细胞周期调控蛋白ICBP90 增殖Jurkat T I 暨南大学硕士学位论文 Abstract Objective To explore effects of some kinds of cell cycle-regulating proteins on the inhibition of Jurkat T cell proliferation by Anisomycin through detecting cell cycle expression of an inverted CCAAT box binding protein ICBP90 and CDK negative-regulating factors including P16 P21 P27 P57 P73 Rb and P53 and cell cycle depedence kinases including CDK1 and CDK2 in the process of Jurkat T cell proliferation Methods CCK-8 assay was used to detect the effect of different concentrations of Anisomycin on Jurkat T cell proliferation Flow cytometry was used to determine the effect of different concentrations of Anisomycin on the cell cycle of Jurkat T cells Western Blot was employed to determine the expressions of ICBP90 P16 P21 P-P21 P27 P-P27 P53 P-P53 P57 P73 P-P73 Rb P-Rb P-CDK1 and P-CDK2 in Jurkat T cells treated with an optimal concentration of Anisomycin at the different time The optimal stimulating time for the change of each protein expression was used to estimate the effect of different concentrations of Anisomycin on the expression of these proteins