第3章 病毒和亚病毒PPT.ppt

（5）裂解、释放 脂肪酶和溶菌酶作用下，细胞裂解，子代phage释放； 水解细胞膜、细胞壁-------裂解-----释放子代噬菌体 大肠杆菌T系列15---25min 裂解量：平均每一宿主细胞裂解后产生的子代噬菌体数，T2为150个，T4为100个； 自外裂解（lysis from without)：大量phage吸附在同一宿主细胞表面，释放大量溶菌酶，导致细胞裂解； 3、噬菌体的效价测定（噬菌体个数/ml）在菌苔上逐步形成的噬菌体群体，由于其侵蚀宿主细胞的结果会使菌苔上出现一个个噬菌斑。因每种噬菌体的噬菌斑有一定的形状 0.1 0.2 噬菌体稀释液 敏感宿主菌液 双层平板检测噬菌斑 底层平板2％ 上层平板1％ 噬菌体+宿主 双层平板法：底层琼脂，上层琼脂45度,细菌与phage混合，37度10h； 优点：弥补不平；同一平面，大噬菌斑；上层琼脂较稀，形成的噬菌斑较大、特征较明显 每种phage的噬菌斑形态固定－鉴定依据，大小2mm，约含107－109phage 效价（titre，titer）：每ml试样中含的具侵染性的phage粒子数，又称噬菌斑形成单位数（plaque－forming unit，pfu），感染中心数（infective centre); 成斑率 噬菌斑效价/电镜效价 4、噬菌体的一步生长曲线 少量病毒与敏感细胞接触，病毒吸附后，高倍稀释，继续培养，定时取样测定培养物中的病毒效价，以感染时间为横坐标，病毒效价为纵坐标，绘制出病毒特征性的繁殖曲线，即一步生长曲线； 潜伏期（隐晦期、胞内累计期）裂解期、平稳期 一步生长曲线 定量描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线，称作一步生长曲线或一级生长曲线。她可反映噬菌体的三个最重要的特性参数---潜伏期、裂解期、和裂解量。 分三个时期，反映三个重要参数——潜伏期、裂解期、平稳期、裂解量 潜伏期 从噬菌体吸附细菌细胞至细菌细胞释放出新的噬菌体的最短时间。分隐晦期、胞内累积期（潜伏后期）。 潜隐期（隐晦期）： 从噬菌体吸附细菌细胞到细胞内重新出现噬菌体的颗粒的最短时间。 裂解期 从被感染的第一个细胞裂解至最后一个细胞裂解完毕所经历的时间。 平稳期 指感染后的宿主细胞已全部裂解，溶液中噬菌体效价达到最高点的时期。 裂解量 每种噬菌体侵入敏感细胞，平均每个细胞最后能装配完成和释放出的噬菌体数称为裂解量，它是相对固定的。 裂解量的计算公式 裂解量= a / b a:裂解期末平均噬菌斑数 b:潜伏期平均噬菌斑数 5、溶源性(lusogeny) (1)温和噬菌体和溶源菌 当噬菌体DNA进入细胞后，在宿主与病毒的相互作用下，病毒DNA整合到宿主的DNA上，同宿主DNA 同步复制，这种噬菌体为温和性噬菌体。 温和噬菌体的侵入并不引起宿主细胞裂解，称溶原性；宿主为溶原菌，它可与温和噬菌体长期共存，一般不出现有害影响； (2)整合的DNA 为前噬菌体，或原噬菌体，原噬菌体一旦脱离宿主DNA就开始复制，引起宿主裂解。含有原噬菌体的宿主细胞称为溶源菌，溶源菌所特有的性质为溶源性。 (3) 溶源性表现如下： 产生烈性噬菌体的潜在能力 具有同源噬菌体感染的免疫性（CI 抑制蛋白产生） 溶源菌在外界理化因子诱导下，可发生高频率的裂解 宿主细胞有时能产生新的生理特性，如溶源性白喉杆菌产生白喉毒素（生物导弹(定向药物)中常用来作为杀伤肿瘤细胞的因子） (4) 温和性噬菌体的三种状态： 游离态 整合态----原噬菌体态 营养态----营养期噬菌体（理化诱导，积极复制，合成和装配状态） (5) 常见的温和性噬菌体 大肠杆菌λ噬菌体 大肠杆菌Mu-1噬菌体 大肠杆菌P1、P2噬菌体 其中大肠杆菌λ噬菌体研究最清楚， E.coli K12（λ）表示 cos位点------12个碱基对构成的粘性末端 (6)、溶源菌的检测（自发或诱导） 少量溶源菌与大量指示菌（遇溶源菌裂解后释放的温和噬菌体会发生裂解循环）混合，加琼脂培养基倒平板，培养后显示出特殊噬菌斑。 溶源菌少数个体自发裂解，形成中央有溶源菌的小菌落，四周有透明圈。 溶原性细菌具免疫性：溶原性细菌对其本身产生的phage或外来的同源phage不敏感，可进入细菌，但不能增殖，也不裂解； 指示菌菌苔 溶源菌菌落 透明的裂解圈 溶源菌独特噬菌斑 3.复合对称代表---T偶数噬菌体 T4噬菌体 λ-噬菌体 噬菌体侵染大肠杆菌 （四）病毒的核酸和蛋白质  1、病毒的核酸： 种类：DNA，RNA ; ds ss; 线状，环状：闭环，缺口环 一种病毒只含有一