第2章-细胞的基本功能-2PPT.ppt

人们对生物电现象的观察可以追溯到很久以前，但对生物电现象的研究，则是在人们对电学的物理知识有了深入了解之后，并随着电测量仪器的不断发展而逐渐深入。在生理学中，对生物电现象的研究，是与对细胞（或组织）的兴奋性的研究密不可分的，因而在本节中，二者经常交叉在一起讨论。 四、组织的兴奋和兴奋性 （1）AP产生的离子学说：电压钳方法的研究 关于细胞受刺激时膜对Na+的通透性增加的原因，Hodgkin和Huxley认为， 可能是电刺激改变了膜的极化状态（膜电位改变），导致膜的通透性改变而出现离子流的结果。 要证实这一猜想，只需人为改变膜电位的大小并观察其对离子流的影响。 然而，由欧姆定律可知，电阻一定时， 电流发生改变，必然引起膜电位随之变化，这样就无法观察膜电位对离子流的影响。于是他们创造性地设计并进行了著名的电压钳实验，通过将膜电位钳制在不同水平，以避免离子流反过来影响电压值。 电压钳方法： 通过电压电极施加指令电压，若该电压变化引起了膜对Na+ 或K+的通透性发生改变，膜上将出现相应的离子流。电流电 极记录到的膜电流值一方面作为实验结果，一方面又作为电 压钳放大器发出的对抗电流的参考值，该对抗电流的大小与 膜离子流相等，但方向相反，因而可维持指令电压（图）。 如果要单独观察Na+电流，可用TEA （tetraethylammonium，四乙基胺）阻断K+外流后得到；单 独观察K+外流，则用TTX（tetrodotoxin，河豚毒）阻断Na+ 内流后得到。 图 电压钳模式图 （2）AP与电压门控离子通道：膜片钳方法的研究 膜片钳（patch clamp）技术： 是将微电极尖端细胞膜上的单个离子通道的电流经高分辨放 大后记录的技术。单个离子通道的电流（简称为单通道电 流）是全或无的，电流很小，是pA（10-12A）级的。 河豚毒和四乙基胺能单独阻断GNa和GK而不影响对方， 同位素标记的两种毒素显示它们分别与细胞膜上不同的“点” 特异结合。 这使人们推断细胞膜中有特殊的蛋白质离子通道的存在。 而所谓膜对离子的通透性的改变，实际上是决定于这些离子 通道蛋白质分子的功能状态。 膜片钳实验 因此有必要对单个通道的特性进行研究。膜片钳技术在这 样的研究背景下被催生出来。它通过与细胞膜接触的微电极 尖端将一小片膜吸入尖端开口，并形成高阻封接，从而使这 一小片膜与其余的细胞膜在电学上完全隔离开，这样就可对 这一小片膜上的单个离子通道的电学特征进行研究。 膜片钳的研究结果： ①通道的开放和关闭都是突然的，说明通道蛋白可以从一种构象快速跃变到另一种构象。 ②通道开放时具有恒定的电导，即通道只有“开”或“关”两种状态，没有中间状态。 ③同一个通道每次开放持续时间不一致，即通道开放的长短具有随机性。 ④若化学门控通道结合了相应的信号分子，或电压门控通道处于特定的膜电位水平时，通道的开放几率增大。 膜片钳实验证明：不论是单个Na+通道电流或K+通道电流 （B），将多次单个通道的电流总和后（C），与电压钳记录 的全细胞膜（许多个）通道的电流（D）结果一致，进一步 证明了细胞生物电现象的离子学说是正确的。　　 （3）电压门控离子通道的结构和性质 ------ 分子生物学方法的研究 Hodgkin和Huxley虽然预言了细胞膜上离子通道在不同条件 下的开闭（即膜离子通透性变化）是RP和AP产生的原因， 却无法进一步揭示离子通道的结构和调控机制。随着分子生 物学的飞速发展，人们对生物电现象的理解也深入到分子层 面。 RP产生机制 AP产生机制 1、细胞受刺激时，膜对钠的通透性增加，因膜外钠浓度高于膜内且受膜内负电的吸引，故钠内流引起上升支直至内移的钠在膜内形成的正电位足以阻止钠的净移入时为止（ENa)。 2、下降支：钠通道关闭，钾通道开放，钾外流引起。随后钠泵工作，泵出钠、泵入钾，恢复膜两侧原浓度差。 电导及AP GNa和GK变化曲线的特点： ① 电压依从性，由去极化激活，GNa激活早，是AP上升支基础；GK激活晚，是AP下降支基础。 ② GNa有失活状态而GK没有此特性 ① 通道的开或关是突然的； ② 通道开放时具有恒定的电导； ③ 开放时间长短不一； ④ 特定信号使开放的机率增大， 而“失活”使开放机率减小。 通道的特性 钠 电 流 AP的特点：“全或无”现象 AP的意义：兴奋的标志 3、动作电位的引起和传导 前已述及，刺激引起细胞膜去极化，可以使电压门控Na+、K+通道开放，从而产生动作电位。但并不是任何强度的刺激都可使细胞产生AP。刺激必须使细胞膜去极化达到一定的水平，才能诱发AP的产生。 （一） 去极化与Na+内流的正反馈 当细胞膜受到刺激