第4章植物细胞工程的基本原理和技术基础PPT.ppt

第4章 植物细胞工程的基本原理和技术基础;植物细胞工程是一门以植物组织和细胞的离体操作为基础的实验性学科。 它是以植物组织细胞为基本单位，在离体条件下进行培养、繁殖或人为的精细操作，使细胞的某些生物学特性按人们的意愿发生改变，从而改良品种或创造新物种，或加速繁殖植物个体，或获得有用物质的过程统称为植物细胞工程。;定义：植物组织在离体（in vitro)条件下和无菌条件下利用人工培养条件培养、生长、发育再生出完整植株的过程。 植物组织培养是二十世纪发展起来的新技术，近三十年来由于组织培养基础理论研究的深入，发展极为迅速，发表的文献浩如烟海，几乎以植物为研究对象的各个分支学科都在广泛进行组织培养。 ; 在这一阶段中，细胞学说的产生和细胞全能性学说的提出为组织培养技术的产生奠定了理论基础。在这些理论的指导下所开展的有关试验，对组织培养技术的建立进行了有益的探索。 细胞学说（cell theory）是Schleiden和Schwann分别于1838年和1839年提出的，其核心内容是，细胞是有机体，亦是生物体的基本结构单位，由它构成整个生物个体。 细胞全能性学说是德国著名植物学家G. Haberlandt在细胞学说的基础上于1902年提出的。他认为，高等植物的组织、器官可以不断分割，直到单个细胞。每个细胞都有具有发展成为一个完整植株的能力。 ; 作为一门技术，它必须具有一定的程序性。也就是说，它应该具有一定的技术模式。在这一阶段，植物组织培养建立了两个与培养技术有关的重要模式，一是培养基模式，二是激素调控模式。 ;1、快速繁殖 运用组织培养的途径，一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株。例如一株葡萄一年繁殖到3万多株，一株兰花一年繁殖到400万株。 2、种苗脱毒 针对病毒对农作物造成的严重危害，通过组织培养可以有效地培育出大量的无病毒种苗。已经取得成功的有马铃薯、草莓、香蕉、葡萄等等。;3、远缘杂交 利用组织培养可以使难度很大的远缘杂交取得成功，从而育成一些罕见的新物种。比如辽宁果树研究所利用这种方法获得苹果与梨的杂交种。 4、突变育种 采用组织培养可以直接诱变和筛???出具抗病、抗盐、高赖氨酸、高蛋白等优良性状的品种。象中国林科院用逐步加大培养基中盐的浓度，直接获得耐盐的杨树株系。;5、基因工程 基因工程主要研究DNA的转导，而基因转导后必须通过组织培养途径才能实现植株再生。 6、生物制品 有些极其昂贵的生物制品，如抗癌首选药物--紫杉醇等，可以用大规模培养植物细胞来直接生产。近年国内在红豆杉组织培养中获得生长量高达0.49gFW/（gFW·d）的细胞系，每升细胞培养物中紫杉醇的产量可达0.25mg。 ;;;;;;1902年Haberlandt根据细胞学说提出了植物全能性理论 植物细胞的全能性（totipotent)：植物细胞具有该植物体全部遗传的可能性，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。 原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因，从理论上讲，生物体的每一个活细胞都应该具有全能性。;1、细胞分化 细胞后代在形态结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化 全能性－多能性－单能性－成熟细胞（功能细胞，一般不再具有分化能力的细胞）;2、细胞的脱分化 分化的细胞在一定条件下，可以转变成为胚性状态，重新获得分裂能力，称为脱分化 脱分化的细胞经过分裂产生无组织结构、无明显极性、松散的细胞团，称为愈伤组织。 3、细胞的再分化和器官发生 细胞再分化是指脱分化后的分生细胞（愈伤组织）在一定条件下，重新分化成为各种类型的细胞，进而发育成完整植株的过程。;胚轴组织脱分化;;器官发生： 愈伤组织在不同培养基上分别可以诱导发生根或芽;影响植物细胞脱分化和再分化的因素： 内部因子：植物的遗传性状和生理状况。 外部因子：营养条件（植物激素、无机盐、有机营养、微量元素等等）和环境条件（温度、湿度、光照等等）。;物理因素：切割损伤和辐射处理 化学因素：化学试剂诱导;4.1.2植物激素的调控作用;;;;脱落酸（aba） 是植物体内存在的一种天然抑制剂，广泛存在于植物器官组织中。在将要脱落和休眠的组织器官中含量更高，它与生长素，赤霉素，细胞分裂素的作用是对抗的。它有抑制萌芽和枝条生长提早结束生长的，增强抗寒能力及延长种子休眠等作用。;;4.2.1培养基的组成和配制 4.2.1.1 培养基的基本成分 1.无机盐： (1)大量元素：C.H.O.N.P.K.Ca.Mg.S.Cl。 (2)微量元素：Fe.Cu.Mo.Zn.Mn.Co.B.Na。 (3)水：培养基95%是水，应使用蒸馏水、双蒸水或使用去离子水,水应放在塑料容器中。 ;2.有机化合物： (1)糖(碳源和能源)， (2)