第8章 基因工程原理3PPT.ppt

Principles of Gene Engineering Principles of Gene Engineering 蛋白质工程可以说是新一代的基因工程。一般首先经过周密的分子设计，然后依靠基因工程获得突变型的蛋白质（mutein），以检验是否达到了预期的效果，如果改造的结果不理想，还需要重新设计再次改造，往往要经过多次实践摸索才能达到改进蛋白质性能的预定目标。 Principles of Gene Engineering 10.2 蛋白质的实验进化 蛋白质的分子设计和结构改造在技术上取得重大突破后，备受各界关注，十多年来发展极为迅速，取得了一系列重要成果。然而，这些成果多数属子理论上的，或是技术上的，获得改进性能的实用蛋白质并不多。其主要原因在于分子设计的不精确性。 Principles of Gene Engineering 分子设计的主要依据来自三个方面关系的知识： ①蛋白质分子间的进化关系，从同源蛋白质序列的微观差异可找出其对空间结构和生物功能的影响：另一方面蛋白质的进化研究也为蛋白质的构造规则提供了信息。 ②蛋白质一级结构与空间结构的关系，由此可以从一级结构预测三级结构。 ③蛋白质结构与功能的关系，找出结构改变对功能的影响。 Principles of Gene Engineering 从已知蛋白质的上述关系可用以推测一级结构的改变对空间结构和生物功能可能的影响，而目前对蛋白质结构规律的认识还十分有限，这种推测也就并不可靠，往往差之毫厘，失之千里。 于是蛋白质改造的另一途径即在实验室条件下模拟生物分子的进化，通过随机变异和靶功能的选择，多次重复，从而获得改进性能的蛋白质。此过程称为实验进化。 Principles of Gene Engineering 蛋白质实验室进化基本过程 正常基因 变异的基因 淘汰有害突变，保留有益突变 筛选 引入突变 使用无校对功能的DNA聚合酶 DNA改组---DNA随机片段化，自身引发PCR，重组合PCR 噬菌体表面展示技术 亲和选择等 Principles of Gene Engineering 10.3 蛋白质工程的进展 目前蛋白质工程更多侧重于对蛋白质的理论研究，并已成为常用的不可或缺的方法。对于蛋白质的研究，大致有以下几个方面：①有助于对蛋白质结构的解析，揭示蛋白质分子结构的规律，由一级结构预测空间结构。②确定蛋白质分子问的相互关系，找出相互作用的氨基酸残基。③阐明蛋白质结构与功能的关系．了解蛋白质的活性部位一和一级结构对生物功能的影响。 Principles of Gene Engineering 在应用方面，几乎所有类型具有开发前景的蛋白质和多肽都用蛋白质工程作过改造的尝试，并取得不同程度的成果。研究最多、取得成果最显著的是生物技术药物和工业用酶的蛋白质工程。蛋白质和多肽类药物包括激素、细胞因子、酶、酶的激活剂和抑制剂、受体和配体、细胞毒素和杀菌肽以及抗体等。作为药物，希望通过改造以提高其活性、特异性和稳定性，控制分子聚集，降低免疫原性和毒副反应．延长在体内的半衰期，增强对靶位点的导向性等。 Principles of Gene Engineering 水蛭素是水蛭唾液腺分泌的凝血酶特异抑制剂，它有多种变异体，由65或66个氨基酸残基组成。水蛭素在临床上可作为抗栓药物用于治疗血栓疾病。为提高水蛭素活性，在综合各变异体结构特点的基础上提出改造水蛭素主要变异体HV2的设计方案，将47位的Asn变成Lys，使其与分子内Thr4或Asp5间形成氢键来帮助水蛭索N端肽段正确取向，从而提高抗凝血效率，试管试验提高达4倍．在动物模型上检验抗血栓形成的效果，提高20倍。 Principles of Gene Engineering 生长激素通过对它特异受体的作用促进细胞和机体的生长发育，然而它不仅可以结合生长激素受体，还可以结合许多种不同类型细胞的催乳激素受体，引起其他生理过程。在治疗过程中为减少副作用，需使人的重组生长激素(rh-GH)只与生长激素受体结合．尽可能减少与其他激素受体的结合。 Principles of Gene Engineering 经研究发现，二者受体结合区有一部分重叠，但并不完全相同，有可能通过改造加以区别。由于人的生长激素和催乳激素受体结合需要锌离子参与作用．而它与生长激素受体结合则无需锌离子，于是考虑取代充当锌离子配基的氨基酸侧链，如第18和21位的His和第174位的Glu。实验结果与预先设想一致，但要开发作为临床用药物还有大量研究工作要做。 Principles of Gene Engineering 组织型纤溶酶原激活刑(t-PA)和单链尿激酶型纤溶酶原激活剂(scU-PA)是两种具有血纤维蛋白专一性的溶栓剂，可在血栓(血纤维蛋白)表面激活纤