细胞信号转导的技术方法[公众微信号：bioworlde]PPT.ppt

细胞信号转导的技术方法;蛋白激酶磷酸化及其活性测定;蛋白激酶磷酸化的检测;经典蛋白激酶活性分析实验流程;较传统激酶活性测定方法的优点;0;Effect of individual MAPK pathways on PRAK activity in intact cells;Control Aniso. Arsenite TNF;P38 MAP Kinase Pathway;蛋白磷酸化位点分析及其功能鉴定;Phosphopeptide map of HSP27 phosphorylated by PRAK in vitro ;+;DNA重组技术的应用 活性诱变体 无活性诱变体 结构与功能的研究;PCR primer;JNK2 JNK3 JNK1 p38 p38? p38? p38? ERK1 ERK2 ERK5;MAPK Dural Phosphorylation Sites L-12 Length * * hp38 DFGLARHTDD-------------EMTGYVATRWYRAPE 25 hP38b DFGLARQADE-------------EMTGYVATRWYRAPE 25 hp38g DFGLARQADS-------------EMTGYVVTRWYRAPE 25 hp38d DFGLARHADA-------------EMTGYVVTRWYRAPE 25 hJNK1 DFGLARTAGTS-----------FMMTPYVVTRYYRAPE 27 hJNK2 DFGLARTACTN-----------FMMTPYVVTRYYRAPE 27 hJNK3 DFGLARTAGTS-----------FMMTPYVVTRYYRAPE 27 hERK1 DFGLARIADPEHDH-------TGFLTEYVATRWYRAPE 31 hERK2 DFGLARVADPDHDH-------TGFLTEYVATRWYRAPE 31 hBMK1 DFGMARGLCTSPAEH------QYFMTEYVATRWYRAPE 32 YHOG1 DFGLARIQDP-------------QMTGYVSTRWYRAPE 25 YSMK1 DFGLARGIHAGFFKCHS--TVQPHITNYVATRWYRAPE 36 YMPK1 DFGLARGYSENPVEN------SQFLTEYVATRWYRAPE 32 YKSS1 DFGLARCLASSSDSRET---LVGFMTEYVATRWYRAPE 35 YFUS3 DFGLARIIDESAADNSEPTGQQSGMTEYVATRWYRAPE 38 domain VII VIII;Construction of p38 loop-12 to ERK like structure;MAPK;病毒技术对于揭示细胞信号通路的作用 腺病毒 逆转录病毒;细胞信号分子特异性抑制剂的应用;几种MAPK通路抑制剂的化学结构示意图:;Effects of SB203580 and PD98059 on endogenous PRAK activity;细胞信号分子的荧光标记;LPS EGF Control;p38;p38;LPS、UV刺激心肌细胞共聚焦显微镜大体扫描;细胞信号分子的三维结构分析;蛋白质三维结构分析对于揭示信号分子的功能的作用;蛋白质与蛋白质相互作用的研究;;1、蛋白质结合实验;2、免疫共沉淀实验;2、FRET 和 BRET;与信号分子相互作用蛋白质分子的相互作用;酵母双杂合系统;Identification of MEF2C as a substrate for p38;第一步 附着;噬菌体展示技术;报告基因技术 研究细胞信号转导通路通过转录因子对基因启动子转录活性的影响。;0;Induction of c-Jun through MEF2C phosphorylation by p38;蛋白质与核酸相互作用技术 研究细胞内蛋白质尤其是转录??子与特定核酸序列的相互作用。;EMSA;对细胞内信号分子的干预技术 研究细胞内蛋白质尤其是转录因子与特定核酸序列的相互作用。;反义核酸技术的应用;RNAi;RNAi;信号分子基因表达检测技术 研究细胞内mRNA表达水平。;Heart Brain Placenta Lung Liver Skeletal Muscle Kidney Pancreas;p38a、b、g、d;THANKS