细胞培养过程中的遗传变异- 植物组织与细胞培养.ppt

细胞培养过程中的遗传变异 离体培养中的遗传与变异特点 体细胞变异的基础 体细胞突变体诱导与筛选的方法 遗传与变异特点 离体培养的遗传稳定性 离体培养下的变异 影响体细胞遗传与变异的因素 离体培养的遗传稳定性 离体培养的细胞学基础是有丝分裂，有丝分裂的DNA半保留复制和染色体的均等分裂机制，从理论上可以保证离体培养物在一般情况下的遗传稳定性。 离体培养的遗传稳定性表现的另一个方面是即使发生某些变异，只需根据需要选择适当的培养方式进行离体繁殖，即可淘汰或选择变异、或分离纯合体。 离体培养下的变异特点 普遍性： 变异可发生在各种培养类型中；各种培养植物中 局限性： 从表型上看，在不同植物类型中经常发生的体细胞变异主要是植株形态（株高、叶形、叶色等）、生长势、育性、某些抗性等性状的变异。 从生理生化特性上看，容易出现同功酶谱、次生代谢的消长等变异。 嵌合性： 嵌合性是指同一有机体中同时存在有遗传组成不同的细胞。 嵌合体可以以不同倍性的形式存在，必须分离培养才能纯化。 离体培养再生植株的表型变异频率 离体培养变异的影响因素 供体植物 遗传背景 倍性水平，二倍体比单倍体稳定 基因型 生理状态 来源于茎尖的愈伤组织的DNA含量及染色体数的稳定性好于来源于薄壁细胞的 继代培养的次数 培养基及培养方式 培养基及培养方式 不同的激素浓度可以有选择地诱导不同倍性的细胞的分裂。 豌豆，低浓度2,4-D(0.25 mg/L)－－多倍体 高浓度2,4-D(20 mg/L)－－二倍体 激素除了引起染色体倍性的增加外，在一些培养中还发现染色体倍性减少的现象。 蚕豆，无激素－多倍体发生频率＝6.31% 10NAA，2.5KT-单倍体＝13.3％ 培养基的物理状态以及培养类型也会引起细胞的变异。一般来讲，悬浮培养的细胞较半固体培养的细胞易产生变异。 体细胞变异的基础 遗传学基础 DNA在核内重复复制－－同源多倍体 体细胞变异的基础 遗传学基础 染色体断裂与重组－－非整倍体、四倍体 产生染色体结构变异的一般不能正常生长 体细胞变异的基础 遗传学基础 非正常有丝分裂－－非整倍体 体细胞变异的基础 分子遗传学基础 碱基突变 DNA序列的选择性扩增与丢失 抗除草剂－草甘磷，3-烯醇丙酮酸莽草酸-5-磷酸合成酶 转座子活化 DNA甲基化 突变的类型及应用 自发突变(spontaneous mutation) 离体培养再生植株的自发变异比自然条件下的变异高得多，一般可高出几百倍 诱导突变(induced mutation) 物理诱变 化学诱变 复合因子诱变 转座子插入诱变 转座子插入诱变 转座子体系--玉米的Ac/Ds系统 Ac（Activation，意为活化）。相当于一个显性因子,它位于9号染色体长臂上,Ac与Ds （Dissociation，意为离异）隔开一段距离,但却能遥控指挥Ds(Ds是不稳定的，它可以从染色体的一个位点跳到另一个位点) 转座子作用：既可直接将外源基因带入细胞内获得新性状，又可以独立插入通过其转座功能诱导变异。 转座子插入诱变 操作过程 采用基因转化的方法将Ac/Ds导入受体细胞 通过体细胞培养或再生植株的自交或侧交使Ac因子切除，由于转座子插入的随机性，即可在切除Ac的植株中筛选出不同变异。 成果：已在苜蓿（颜色改变）、马铃薯、番茄、甘蓝等多种植物上获得可利用的体细胞变异植株。 突变体的应用 创造育种中间材料或直接筛选新品种 在全世界50多个国家中，已培育出1000多个由直接突变获得的或由这些突变体杂交而衍生的品种 通过体细胞诱变选育的谷类作物品种中，品质得到不同程度改良的占34.3％。 抗病，占诱变品种的1/4 耐盐 抗除草剂 耐寒 耐旱 突变体的应用 遗传研究 用于基因功能鉴定 突变DNA序列用于分子标记 发育生物学研究 用于建立器官发育模式 分析鉴定一些基因的表达与植物发育的关系 在烟草、玉米中均通过质体突变体分离鉴定了与植物叶绿体发育的基因 突变体的应用 生化代谢途径研究 根据需要建立某一代谢途径中每一个调节点的突变体。 烟草硝酸还原酶缺失突变体cnx和nia 具有实用性的突变体 直接选择法 正选择法： 用一种含有特定物质的选择培养基，在其上只有突变的细胞能够生长，非突变细胞不能生长，从而直接筛选出突变体的办法。 小麦幼胚愈伤组织--1.4%NaCl N6培养基＝＝小麦耐盐系。 900个甘薯胚性细胞系--γ射线--2.0%NaCl==22个抗盐愈伤组织 直接选择法 负选择法（富集选择法，又称浓缩法 ）： 在特定培养基中，让正常细胞生长繁殖，突变体细胞受抑制不分裂呈休眠状态， 然后用一种能毒害正常生长细胞，而对休眠细胞无害的药物淘汰正常细胞， 再用正常培养基恢复突变体生长。 该方法主要应用于营养缺陷