019 显微鉴别法.docVIP

显微鉴别法 1简述 显微鉴别法系指用显微镜对药材(饮片)的切片、粉未、解离组织或表面制片及含片粉未的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。 此法适用于: (1)药材性状鉴别特征不明显或外形相似而组织构造不同; (2)药材呈粉末状或已破碎，不易辨认或区分: (3)凡含药材粉末的制剂; (4)用显微化学方法确定药材中有效成分在组织中的分布状况及其特征。 在进行显微鉴别时，首先要将样品制成适于镜检的标本。对于完整的药材可制成各种切面的切片;对于粉末药材(包括丸、散等成方制剂)可直接装片或作适当处理后制片。 药材切片标本的制作方法较多。在药材鉴定的研究工作中往往将其制成石蜡切片(永久切片)，因制成的石蜡切片外形较完整，厚薄均匀，且可制得连续切片，既便于观察，又能长期保存。但由于制片技术较复杂，费时太多，不适用于日常检验。所以在中药鉴定工作中通常采用徒手切片或滑走切片法制片;为观察叶类、花类及全草类药材的叶片、花冠、尊片、苞片等的表皮组织及其附属物的特征，还需要将其制成表面装片;为清楚地观察比较坚硬的细胞组织，如导管、纤维、石细胞等的形态，往往还要进行组织解离后装片;观察花粉粒、抱子等的形态特征或构造，需用花粉粒与抱子制片法制片;观察矿物药或较坚硬的动物类药材如珍珠、石决明在观察前临时制备，故统称为临时制片技术。 本规程以中国药典现行版和局颁、部颁标准收载品种的显微鉴别项目要求为主，故主要介绍与临时制片技术有关的仪器、用具、试液和操作方法等。 2仪器与用具 2. 1仪器生物光学显微镜(应配有目镜测微尺和载物台测微尺，最好具2.5X或4X物 镜头和偏光装置)、显微摄影装置或显微描绘器、电脑联机装置及其图像处理软件、滑走切片机、小型粉碎机、台式离心机、医用超声仪等。 2. 2用具 2.2.1放大镜、刀片、解剖刀、慑子(包括粗慑及眼科弯慑与直慑)、剪(眼科剪与手术剪)、 解剖针等。 2. 2. 2载玻片、盖玻片。 2.2.3吸湿器(即玻璃干燥器改装成底部放入蒸锢水并加微量苯酣防霉，上部瓷板上置 药材样品，利用潮气润湿药材样品)、培养皿或小烧杯(放切片用，切片后的处理均可在其中进行)、酒精灯、铁三角架、石棉网、滴瓶、试管，试管架、滴管、玻璃棒(粗与细)、乳钵、量筒等。 2.2.4毛笔(从刀上刷取切片用)、铅笔(HB、3H或6H铅笔绘图用)、带盖搪瓷盘(装切 片标本用)、纱布、绸布、滤纸、火柴等。 3试液 3.1水合氯醒试液此液为常用封藏液，也是透化剂。可使干缩的细胞膨胀而透明，并能 溶解淀粉粒、树脂、蛋白质、叶绿素及挥发油等，加热后透化效果更为明显。 3.2甘油醋酸试液(斯氏液)此液为常用封藏液。专用于观察淀粉粒形态，可使淀粉粒 保持原形，便于测量其大小。 3. 3甘油乙醇试液此液为封藏液，也是软化剂。常用于保存植物性材料及临时切片，有 软化组织的作用。 3.4苏丹E试液此液可使木栓化、角质化细胞壁及脂肪油、挥发油、树脂等染成红色或 淡红色。 3. 5钉红试液此液可使黯液染成红色。本液应临用新制。 3. 6间苯三酣试液此液与盐酸合用，可使木化细胞壁染成红色或紫红色。 3. 7腆试液此液可使淀粉粒染成蓝色或紫色;蛋白质或糊粉粒染成棕色或黄棕色。 3.8硝锚酸试液此液为常用的植物组织解离液。解离漫泡时间，按样品的质地不同 而异。 3. 9 α-秦酣试液此液可使菊糖染成紫红色，并很快溶解。 3. 10硝酸隶试液(米隆氏试液)此液可使糊粉粒染成砖红色。 3.11氯化钵腆试液此液用于检查木质化与纤维素细胞壁，前者显黄棕色，后者显蓝色 或紫色。 以上水合氯醒等试液，均应符合(中国药典2005年版一部附录xv B)规定。4药材显微制片 4. 1横切或纵切制片 4.1.1药材的预处理将应观察的部位，切成适当大小的块或段，一般以宽1cm、长3cm 为宜，切面削平整、。质地软硬适中的样品可直接进行切片;质地坚硬的则须先使其软化后再切 片。软化方法可采用放在吸湿器中闷润，或在水中浸软或煮软。经软化处理的材料，检查软化是否合适，可用刀片切割材料，若较容易切下薄片，则表示软化适宜。有些根、根茎、茎及木类药材，质地较坚实，可将削平的切面浸于水中片刻，待表面润湿时取出，直接切片也能切成较完整的薄片。过于柔软的样品，可将其浸入70%~95%乙醇中约20分钟，待样品变硬些，再切片。对于细小、柔软而薄的药材，如种子或叶片，不便直接手持切片，可用胡萝卡、土豆、软木塞或橡皮等作夹持物。将夹持物一侧切一窄缝，使样品嵌入其中，叶类药材也可用质地松软的通草或向日葵的茎髓作夹持物。新鲜样品则直接漫入石蜡中，使样品外面包上一层石蜡，再切片。 药材预处理时，应注意不能影响要观察的显微鉴别特征。如观察菊糖、霜液等在软化、切片、装片等过程中，均不可与