第十八章 高效液相色谱法 分析化学教研室.pptVIP

高压输送流动相 高效固定相 高灵敏度检测器 HPLC与经典液相色谱法比 颗粒极细、柱效高，分离效率高 高压输液泵输送流动相 高灵敏度检测器（紫外，荧光） * 二、化学键合相色谱法 以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合相色谱法 （一）正相（键合相）色谱法 1.固定相：极性键合相 如氰基(－CN)、氨基(－NH2) 键合硅胶 2.流动相：烷烃加醇类 3 适用范围：极性至中等极性的分子型化合物 4. 保留行为： 组分极性↑，k↑， tR 大，后洗脱出柱。 流动相的极性↑，洗脱能力↑ ，组分 k↓，tR ↓，先洗脱出柱。 （二）反相键合相色谱法 1.固定相：非极性键合相 如十八烷基硅烷（C18，ODS）/辛烷基(C8)键合硅胶 2.流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极性调整剂 常用甲醇－水、乙腈－水等 4.分离机制——疏溶剂理论 （1）溶质的分子结构（极性） 极性↓，疏水性↑，k ↑，tR ↑ 同系物碳数越多，极性越弱，k越大 引入极性取代基，降低疏水性，k值变小 （2）固定相 键合烷基的疏水性随碳链的延长↑ ，溶质的k ↑ 硅胶表面键合烷基的浓度↑ ，溶质的k ↑ （3）流动相 极性↑ ，洗脱能力↓，使溶质的k ↑ 溶剂比例：水的比例↑ ，使k ↑ pH：影响弱酸、弱减的离解 流动相的pH降低，弱酸k ↑ ，tR ↑ ；弱碱k↓ ——用少量弱酸、弱碱或缓冲溶液，调节流动相的pH，抑制有机弱酸、弱碱的离解，增加疏水缔合作用，使k变大。 适用于3≤pKa≤7的弱酸、7≤pKa≤8的弱碱 一、化学键合相色谱法的固定相 （一）键合相的种类 1.非极性键合相 ： 非极性烃基，如C18﹑C8﹑C1与苯基等 用于反相色谱； 长链烷基可使溶质的k增大，选择性改善，载样量提高，稳定性更好。 2.弱极性键合相： 醚基和二羟基等键合相 用于反相或正相色谱 3.极性键合相： 常用氨基﹑氰基键合相 （ ≡Si(CH2)3NH2, ≡Si(CH2)2CN)键合硅胶 一般用于正相色谱 （二）键合相的性质和特点 1.键合反应 硅氧烷（Si－O－Si－C）型： 含碳量：含碳的百分数，表示键合反应的量 覆盖度 ：已反应的硅醇基数目占硅胶表面硅醇基总数的比例 封尾：在键合反应后，用三甲基氯硅烷等进行钝化处理，减少残余硅醇基。 二、化学键合相色谱法的流动相 对试样有适宜的溶解度，k在1~10范围内，最佳范围2~5 ； 与检测器相适应。例如用紫外检测器时，选用截止波长小于检测波长的溶剂。 纯度高，粘度小。（低粘度流动相如甲醇乙腈等可以降低柱压，提高柱效） 流动相对分离的影响 n由色谱柱（固定相）性能决定； α主要受溶剂种类的影响； k受溶剂配比的影响。 三、分离条件的选择（一） HPLC中的速率理论 1. 涡流扩散项　A=2λdp 球形、小粒度、均匀固定相，匀浆高压填充，降低A 2. 纵向扩散项　B = 2γDm Dm很小，且UU最佳，忽略 3.传质阻抗项 (1)固定相传质阻抗系数CS忽略 ，因df小 (2)流动相传质阻抗系数C=Cm + Csm *动态流动相传质阻抗-在流路中心组分走的快*静态流动相传质阻抗-部分组分分子在固定相微孔内滞留 HPLC法分离条件的选择： H=A+Cmu+Csmu HPLC如何提高柱效： ①小粒度、均匀的球形化学键合相； ②低黏度流动相，流速不宜过快； ③柱温适当 组成 输液系统 进样系统 色谱柱系统-色谱柱 检测器 数据记录处理系统-工作站 输液系统 高压输液泵 恒流泵：在输送流动相过程中流量恒定。常用柱塞往复泵 双泵：为了克服流量的脉动。有串联式和并联式 防止固体微粒进入泵体 流动相不应含有腐蚀性物质 防止溶剂瓶内的流动相被用完 不超过规定的最高压力 流动相一般应该先脱气 （三）荧光检测器（FD) 荧光强度 (F) 与及荧光物质浓度 (C) 之间的关系为： F=KC * 第十八章 高效液相色谱法 分析化学教研室 现代液相色谱分析方法——分离分析 HPLC与气相色谱法比 不受试样的挥发性和热稳定性限制 可用各种溶剂作流动相 在室温下分离 第一节 高效液相色谱法的主要类型和原理 一、高效液相色谱法的主要类型 按照分离机理分类： 分配色谱法 吸附色谱法 离子交换色谱法 空间排阻色谱法 … … … 正相 反相 离子抑制 离子对 正相（键合相）色谱法：固定相极性大于流动相极性的液液分配色谱法-- 反相（键合相）色谱法： 分离机制：分配或吸附 3