第一组实验报告热假丝酵母产SCP发酵过程的分析.docVIP

生技1001班 第一组实验报告 第一组（5人） 组员（按学号）喻楚川 婷婷、晓光、201024李培利聂京 分工：喻楚川: 第一次没来，第二次协助组员实验。 张婷婷: 负责绝大部分具体的实验操作：还原糖0D540, NH2-N含量测定。 陈晓光：协调实验的进程，记录分析数据，撰写实验报告。 李培利：配制DNS试剂，部分pH标准缓冲液，少部分实验操作 聂京： 主要负责测定菌浓OD700，配制DNS试剂，少部分实验操作。 实验一：热带假丝酵母产SCP发酵过程的分析 实验目的 单细胞蛋白（SCP)含有丰富的氨基酸、还原糖等物质。本实验对四种培养基分别培养的热带假丝酵母产SCP发酵过程的分析，掌握发酵过程有关参数的测定和分析方法。 材料和方法 菌种：热带假丝酵母，发酵摇床等各种仪器。 四种培养基：碳源分别是葡萄糖（P)、麦芽糖(M）、蔗糖（Z）、水（不含任何糖），蛋白胨、MgSO4、KH2PO4、pH自然。 分析测定项目：发酵液菌体干重、还原糖量、NH2-N。 实验过程 1. 发酵液取样 接种培养好后，从四种培养基中各取发酵液1ml，稀释20倍制成菌悬液。 2.测定菌浓OD700： （1）用蒸馏水作对照，作空白调零在波长700nm分别测定四种不同碳源的菌悬液的OD值。记录数据。 （2）依据下列表格，通过换算发酵液菌体干重。（表1） 表1 发酵液菌体干重与OD OD（稀释100倍） 0 0.138 0.129 0.235 0.205 0.276 0.254 0.345 0.334 10ml发酵液菌体干重(g) 0 0.1106 0.1082 0.1639 0.1546 0.1981 0.1934 0.2244 0.2133 线性方程：y=0.6331x+0.017 （y：10ml发酵液菌体干重；x：OD700值；相关系数r=0.9858） 葡萄糖浓度 （mg/ml) 0 0.08 0.16 0.24 0.32 吸光度值 0 0.015 0.102 0.25 0.260 2. 发酵液中的还原糖浓度、氨基氮含量测定 （表3） 表3 四种培养基各参数测定数据记录总表 P葡萄糖 M麦芽糖 Z蔗糖 水 菌浓OD700 0.628 0.517 0.452 0.411 还原糖0D540 0.934 0.993 0.846 0.755 NaOH体积 1.92 1.80 1.50 线性方程：y=0.6331x+0.017 y表示10ml发酵液菌体干重x表示OD700值OD700值线性方程OD700×0.2×100。 ②还原糖浓度 （表4） 表4 葡萄糖标准曲线 由这标准曲线，y=0.9438x-0.0256, y表示还原糖浓度，x表示OD540值，由稀释度为20，所以还原糖浓度=y×20。 ③氨基氮含量计算： 由公式 ，其中C=0.2(mol/l),M=14.01(g/mol)。 推导发酵液氨氮含量N%（mg/100ml)=600V。 由①②③可知参数分析结果为：（表5） 表5 四种培养基各参数测定数据处理总表 P葡萄糖 M麦芽糖 Z蔗糖 水 发酵液干重（g/L) 8.2917 6.8863 6.0632 5.5441 还原糖(mg/ml) 17.1182 18.2319 15.4571 13.7394 氨基氮含量（mg/100ml) 1152 1080 900 结论 由表6直观看出在发酵液干重参数中：PMZ水；在还原糖含量参数中： MPZ水；在氨基氮含量中，PMZ。由此得出，在这四种培养基中，葡萄糖最有利于的热带假丝酵母菌体生长以及氨基氮的积累，麦芽糖最有利于菌体还原糖的积累。蔗糖对菌体菌体一般，水（不含糖）作用最差。 思考题： 简述测定菌浓的方法？ 离心法、稀释平板计数、重量法、血球计数板计数法、电导率法、浊度法。 本实验所用就是浊度法：当光线通过微生物菌悬液时, 菌体的散射和吸收作用使光线的透过量降低。在一定的范围内, 细胞浓度与透光度成反比, 与吸光度成正比。 还原糖、总糖的测定有什么区别？简述它们的测定方法 还原糖直接取样稀释好后测定，测定总糖通常以还原糖的测定法为基础，将非还原性双糖或多糖，经酸水解成还原性单糖，再按还原糖测定法测定，测出以转化糖换算的总糖量。 还原糖测定方法有：直接滴定法、高锰酸钾滴定法、萨氏法、碘量法、砷钼酸比色法、3,5二硝基水杨酸、旋光法等，总糖测