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β—连环素和P65在喉癌侵袭转移过程中关系研究 　　[摘要] 目的 检测喉癌中的β-连环素和P65的表达情况，观察比较其表达特点，分析二者在喉癌侵袭转移过程中的关系。 方法 收集不同分化程度的喉癌患者手术标本47例。采用免疫组化SP法对其染色，光镜下分别观察以上不同组织中β-连环素和P65的表达情况。 结果 （1）在临床分期Ⅲ、Ⅳ期P65/β-连环素组合同时阳性表达比Ⅰ、Ⅱ期表达率高（P 　　[关键词] 喉癌；P65；β-连环素；免疫组织化学 　　[中图分类号] R739.65 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）02（c）-0004-03 　　喉癌占全身恶性肿瘤的5.7%～7.6%，其中93%～99%为喉鳞癌[1]。目前喉鳞癌的病因及分子机制发展情况尚未完全阐明[2]。本研究检测喉癌中的β-连环素和P65的表达情况，观察比较它们的表达特点，分析二者在喉癌侵袭转移过程中的关系，从分子水平探讨喉癌的发病机制，同时为喉癌的预防和靶基因治疗提供参考。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　收集威海市立二院1999年1月～2006年1月头颈外科住院手术治疗的原发喉鳞状细胞癌石蜡标本47例，其中，声门上型17例，声门型28例，声门下型2例；其中，生存超过5年者30例，低于5年17例；男性38例，女性9例；年龄为38～76岁，平均61.5岁。相应癌旁非癌组织25例作为对照（距肿瘤边缘均≥0.5 cm）。所有癌旁非癌组织术后病理均证实为慢性炎症。 　　1.2 试剂 　　P65多克隆抗体、兔抗人phospho-NF-Kb、鼠抗人β-catenin单克隆抗体EnvisionTM十加强型试剂盒、抗原修复液、APES黏片剂等试剂均由上海长岛生物技术有限公司提供。 　　1.3 免疫组织化学（SP法） 　　所有标本均经10%中性甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋切片，HE染色和病理组织学确诊。石蜡包埋组织块切片厚4 μm，对石蜡切片进行免疫组化链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶（SP）法测定。依常规免疫组化方法，按试剂盒说明书操作，用已知P65多克隆抗体、兔抗人phospho-NF-Kb、鼠抗人β-catenin单克隆抗体阳性的喉癌标本做为阳性对照，用 PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。 　　1.4 结果判断 　　P65蛋白以细胞质或细胞质和核膜同时着棕黄色或黄褐色为阳性反应。采用染色强度评分乘以阳性细??面积评分的积分表示[3]。染色强度评分为，0级：阴性染色，与背景色一致；1级：弱阳性染色，淡黄色；2级：阳性染色，黄色；3级：强阳性染色，棕黄色。β-catenin在正常上皮细胞中仅表达于细胞膜，组织染色强度评分与P65相同。光镜下任意选取5个高倍视野，按阳性细胞所占比例的平均数分级，阳性细胞面积分为，0级：阳性细胞占75%为膜表达正常，膜表达阳性细胞率≤75%为膜表达降低，≥10%癌细胞胞质和（或）胞核出现2级阳性信号为β-catenin异位表达。β-catenin膜表达降低和胞质、胞核异位表达均归为β-catenin异常表达，统称为β-catenin阳性表达。 　　1.5 统计学处理 　　采用SPSS 12.0 for windows软件进行统计分析，组间的比较采用卡方检验。P 0.05）。 　　3 讨论 　　β-连环素（β-catenin，β-cat）与细胞内结肠腺性息肉病蛋白（adenomatous polyposis colic，APC）结合，参与Wnt信号传导途径，调节细胞的增殖，导致细胞癌变[4]。P65是通常所说的NF-κB即指P50/P65异二聚体的主要构成部分。在外来各种因素的刺激下，激活的NF-κB通过与细胞因子、黏附分子及生长因子的基因启动子区域内相应的部位结合后，启动靶基因的转录[5]。本研究发现，P65和β-catenin双阳性表达在47例喉鳞癌中的阳性表达率为59.6%，明显高于癌旁组织中的双阳性表达，且二者在低中分化、临床Ⅲ和Ⅳ期、有淋巴结转移组双阳性表达率较肿瘤早期、高分化、无淋巴转移组高，肿瘤恶性程度越高，二者协同作用越强，随着肿瘤临床进展，二者协同增强[6-8]。据此可以推断：联合观察二者在喉癌中的阳性表达更具有研究价值。在根据生存时间分组患者标本中无差异，说明影响喉癌生存的因素较多，二者可能是喉癌发展中的环节因素。P65和β-catenin有一些共同调控的靶基因[9-11]，如CyclinD1，c-myc和COX-2、MMP-9，它们都与喉癌的形成和发展密切相关，β-catenin和P65可能共同影响下游致癌靶基因的表达，并且通过下游基因的负反馈相互影响，二者在喉癌中的表达机制目前尚未完全清楚，有待于进一步研究。 　　[参考文献] 　　[1] 田