丹参酮ⅡA对复苏后大鼠脑NMDAR1表达影响及保护作用.docVIP

丹参酮ⅡA对复苏后大鼠脑NMDAR1表达影响及保护作用 　　DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2013.11.008 　　基金项目：江西省卫生厅中医药科研基金课题（2010A074） 　　作者单位：330006 南昌，南昌大学第一附属医院急诊科 　　通信作者：张慧利，Email：zhhuili66@163.com 　　【摘要】 目的 探讨丹参酮ⅡA对大鼠心肺复苏后脑NMDAR1蛋白表达的影响及对脑组织的保护作用。方法 将78只SD雄性大鼠随机（随机数字法）分为3组：A组（假手术组， n =6），B组（对照组， n =36），C组（丹参酮ⅡA干预组， n =36），通过制备窒息致大鼠心脏骤停动物模型，C组复苏即刻予以丹参酮ⅡA 15 mg/kg静脉推注，B组予以等量生理盐水静脉推注，在自主循环恢复后（ROSC）1、6、12、24、48、72 h断头取脑，应用免疫组织化学染色法检测脑组织NMDAR1和Caspases-3的表达，干湿质量法测脑组织含水量。实验结果组间比较采用单因素方差分析。结果 ①B组在ROSC后1 h脑NMDAR1蛋白表达明显增高，6 h达到高峰，12 h逐渐降低，24 h仍高于正常，在48 h表达低于正常，72 h更低，与A组比较差异具有统计学意义（P0.05）。②B组Caspases-3蛋白表达在ROSC后呈上升趋势，48 h达高峰，后逐渐降低，但72 h仍高于正常，与A组比较差异具有统计学意义（P0.05）. ②The level of brain Caspases-3 in group B increased after ROSC，and reached its peak at 48 h after ROSC， then declined and maintained above normal at 72 h，and this variation was significantly different from that of the group A （P 　　【Key words】TanshinoneⅡA；NMDAR1；Caspases-3；Brain edema；Cardiac arrest；Cardiopulmonary resuscitation；Rats 　　心脏骤停（sudden cardiac arrest，SCA）严重威胁患者生命，有效的心肺复苏（cardiopulmonary resuscitation，CPR）是救治SCA患者最主要方法；而CPR后即使恢复了自主循环但仍有部分患者存在不同程度脑损伤。临床统计发现SCA后短期生存者中有50%死于神经功能障碍，20%～50%长期存活者中存在神经功能后遗症，患者出院社会回归率在2%～22%[1]，因而CPR关键是脑复苏。丹参酮（tanshinone）是丹参的有效活性组分，其中丹参酮ⅡA为丹参酮中含量最高的活性成分[2]，它具有清除自由基与抗氧化作用，降低血液黏度，抑制凝血，促进纤溶，抑制血小板聚集及促进血栓溶解等作???，近年来证实丹参酮ⅡA对缺血的脑组织有保护作用，陈峰等[3]报道丹参酮ⅡA注射液能减少缺血-再灌注损伤。本实验拟通过制备窒息致大鼠心脏骤停动物模型，探讨丹参酮ⅡA对大鼠心肺复苏后脑NMDAR1的影响及脑保护作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器及试剂 　　1.1.1 主要仪器 M8001A菲力浦有创心电监护仪（德国菲力浦公司）；TKR-200小动物呼吸机（江西特力麻醉呼吸设备有限公司）。 　　1.1.2 主要试剂 兔抗鼠NMDAR1多克隆抗体免疫组织化学染色试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司），兔抗鼠Caspases-3多克隆抗体免疫组织化学染色试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司），丹参酮ⅡA磺酸钠注射液（上海第一生化药业，2 mL∶10 mg/支，生产批号120115）。 　　1.2 动物与分组 　　选择成年、雄性、健康的SD大鼠78只，体质量300～350 g，8～9周龄，由南昌大学医学院实验动物中心提供。将78只大鼠随机（随机数字法）分为3组：A组（假手术组， n =6），B组（对照组， n =36），C组（丹参酮ⅡA干预组， n =36）。 　　1.3 SCA模型制备 　　将SCA模型组大鼠参照文献[4]经典窒息模型制作方法制作SCA模型。给予3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，气管切开置管接呼吸机，行右侧股动、静脉置管，动脉导管接压力传感器，静脉供输液给药用。大鼠术后室温下稳定10 min，于呼气末夹闭气管插管致SCA。SCA的定义为：①心电图呈心室纤颤、停止或电机械分离；②收缩压≤25 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）。夹毕气管8 min