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关于4—苯基氨基喹唑啉衍生物合成及体外抗白血病活性研究 　　摘要：抗菌活性的喹唑啉类化合物在治疗癌症等方面表现出的抗菌性一直备受关注。本文以苯胺喹唑啉类化合物分子，以JANEX-1为先导化合物，结构修饰两个系列共18个目标化合物。合成了6个未见文献报道的关键中间体，其结构通过1H-NMR证实。体外抗人白血病K562细胞实验表明，目标化合物抗白血病活性高于JANEX-1。 　　关键词：4-苯基氨基喹唑啉衍生物 合成 白血病 　　【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1008-1879（2012）09-0009-01 　　表皮生长因子受体（epidermal growth factor recepter，EGFR）是关乎哺乳动物死亡、细胞增殖与分化的关键，在很多类型的肿瘤治疗中，均出现一种或多种的EGFR家族受体的过度表达，其引发的细胞恶性转化是目前肿瘤治疗领域的关注点。喹唑啉类化合物最主要的应用就是可以作为EGFR酪氨酸激酶抑制剂，从而表现出较好的???癌活性。白血病是由于造血干细胞或造血祖细胞恶性克隆引起的增殖性疾病，位列危害人类生命健康的十大恶性肿瘤的一席。根据有关数据估计，每年已知被披露出来的白血病例超过27万例，死其中因白血病死亡的又超过2万例。 　　JAKs与STATs形成的一种组合非受体酪氨酸蛋白酶的因子信号调节，JAK3引起在淋巴系统的表现是细胞因子信号调节中重要的部分。在新型的抗白血病药物研究中抑制剂因其强大的抗免疫与抗炎症备受关注。JANEX-1是苯胺喹唑啉类特异性JAK3激酶抑制剂，吸收率高，反应条件温和，试验操作较为方便，相关报道的资料比较少，文中通过用苯胺喹唑啉类化合物分子与激酶催化位点的键合模型来作为为基石来对此类化合物进行结构修改，设计并合成了目标化合物，结果显示目标化合物Y3，Y5对人白血病细胞株K562有较好的抑制能力（在浓度为10-5mol/L时抑制率分别为64.47%和75.85%，超过先导物JANEX-1在该浓度下的抑制率46.06%）。其中，目标化合物其体内的抗白血病药理活性、激酶抑制活性、作用机制及免疫抑制活性研究仍然在探索中。 　　1 苯胺喹唑啉类先导化合物的结构 　　由同源模型建立的JAK3激酶结构可知，进行设计结构获得了苯胺喹唑啉类抑制剂，凭借竞争激酶的ATP结合位点使得JAK3的活化得到很好的抑制。并且，JAK1、JAK2、SYK、BTK、LYN及受体酪氨酸蛋白激酶IRK在苯胺喹唑啉类先导化合物JAK3选择性抑制作用（JAK3 IC50=5nM），在350μM的浓度下不受抑制。 　　2 抗白血病活性的实验方面 　　2.1 仪器与试剂。用BRUKER傅立叶变换红外光谱-红外显微镜联用仪来对红外光谱进行测定；以Bruker AVANCE-300型核磁共振仪（TMS作为核磁共振氢谱的内标）测定；X-6显微熔点测定仪（温度计校正）；Agilent GC6890-MS5973i型质谱仪。 　　通过人的慢性粒细胞急性白血病细胞系K562细胞株来作为测试的对象，利用MTT比色法来观察目标化合物、先导及对比物对体外培养的K562细胞生长的抑制效果。结果表明，目标物Y5活性是最强的，IC50为0.34×10-6mol/L，比原型分子WHI-P131要高。 　　2.2 化合物的合成。原料是6-氨基藜芦酸甲酯，经过氯代、烃化及中和反应制备出来的JANEX-1，接下来经过酚羟基酯化反应来得到目标化合物。酰化试剂的选择：酰氯为酰化试剂，酰氯的活泼性高，可作为活性较低的酚羟基的酰化来使用，但也正凭借其强酰化能力使得副反应容易发生。另一方面，结构复杂的酰氯购买难度很大，若果自制的纯度不够高，会导致下一步反应容易产生多种副产物的混合物，需通过柱层析的分离纯化。若选择羧酸-苯磺酸混合酸酐作为酰化试剂：相比之下，该酰化试剂活性要比酰氯的低，因为JANEX-1中酚羟基的活性较低，所以它的反应很难完全。如果通过DCC法来制备，由于其产物中含有大量的杂质，所以经过柱层析分离纯化很有必要。 　　3 结果与探讨 　　3.1 K562白血病细胞受Z系列化合物的抑制比较低，在10-5mol/L的浓度下其抑制率均未超过50%。从化合物的结构方面来考虑，可能是因为成酯后掩盖了4’-OH，无法与Asp967形成氢键，所以使得它的抑制能力下降。但这仅仅是体外活性筛选，Z系列化合物无法在酯酶的作用下水解，若进行体内活性测验，化合物4’-OH会在体内大量酯酶的作用情况下水解暴露，预计会对激酶的抑制能力得到提高。 　　3.2 文章报道喹唑啉7位引入α，β-不饱和结构由于与Cys-977距离较远，共价结合不能快速形成。而在本论文中将喹唑啉7位进行结构修饰从而使得化合物抑制活性得到提高，通过比较，我们发现在