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色谱分析法 色谱分析法概论 色谱分析法定义 色谱分析法(chromatography)：以试样组分在两相 （固定相和流动相）间的溶解、吸附、分配、离子 交换或其它亲和作用的差异为依据而建立起来的各 种分离分析方法称色谱分析法。即利用物质的物理 及物理化学性质的差异，将多组分混合物进行分离 和测定的一种分析方法。色谱分析法是仪器分析常 用的方法之一。应用对象：主要是混合物中有机成 分的分离和分析。 色谱分析法的发展历史 色谱法的创始人是俄国植物学家茨维特，(M. S. Tswett)1903年他将植物色素的石油醚浸取液倒入填充有碳酸钙的直立玻璃管中，浸取液中的色素被碳酸钙吸附，通过加入石油醚冲洗，色素中各组分互相分离,形成不同颜色的色带。 1906，色谱图 1952，Golay， 小口径毛细管 分辨率和柱效能 理论论述 1970---- 高效液相色谱(HPLC) 检测模式和性能优越的检测器 色谱联用 1979，石英毛细管色谱柱 毛细管电泳技术 1981，熔融石英毛细管 电迁移进样 荧光检测 蛋白质分析、糖分析、DNA测序、手性分离、单细胞分析 1954 中科院大连化学物理研究所 第一张色谱图 色谱分析法的分类 1、按两相的聚集状态 吸附色谱：吸附性能的差异 气固 液固 分配色谱：分配系数的不同 溶解度 液体 离子交换色谱：分离组分与固定相离子进行可逆交换 离子交换树脂 空间排阻色谱：分子筛 葡聚糖凝胶 柱色谱(玻璃、不锈钢、石英) 气固 液固 纸色谱 液液 薄层色谱(硅胶、聚酰胺) 液固 色谱分析法的特点和局限性 一、特点 1、选择性好 固定相 操作温度 沸点相近的混合物 同位素 同分异构体 对映异构体 2、分离效率高，分析速度快 气相色谱 气体黏度小 色谱柱 高效液相色谱 高压泵 色谱填料 3、灵敏度高、样品用量少 检测器 热导池检测器，μg 氢火焰离子化检测器，百万分几-6 电子俘获检测器 火焰光度检测器，十亿分几-9 气相色谱 气体 易挥发的有机物 沸点高 热裂解 高效液相色谱 不易挥发、高沸点 不稳定 糖类、大分子化合物 药物分析 石油工业、环境保护、临床化学、药物与药剂、农药、食品、卫生防疫理化检验、司法检验 给不出定性结果，需要已知的标物质作对比，或将样品的数据与标准物质的数据进行对比，与质谱、红外等波谱鉴定仪器联用 定量时需要标准物质 对个别异构体和固体物质分析能力差 色谱图和相关术语 1、色谱图(chromatogram)：进样后检测仪器记录下来的检测器响应信号随时间或载气流出体积分布的曲线图。 3、色谱峰(chromatographic peak) 样品随流动相经过色谱柱后，分离开的各组分经过检测器时产生的吸收峰，峰状微分曲线。 6、峰高 色谱峰最高点至峰底的垂直距离 AB 表示符号:h 色谱曲线的意义 色谱峰数=样品中单组份的最少个数； 色谱保留值——定性依据； 色谱峰高或面积——定量依据； 色谱保留值或区域宽度——色谱柱分离效能评价指标； 色谱峰间距——固定相或流动相选择是否合适的依据。 色谱现代发展及相关联用技术 1、理论发展 Tsweet的经典色谱 气相色谱不断完善 色谱热力学和动力学 色谱分离的最佳途径 热力学：色谱峰间的距离。 研究内容：组分保留值与热力学参数以及组分结构之间的构效关系的规律，主要用于定性。 动力学：色谱峰宽窄 研究内容：色谱流出曲线的形状、谱带展宽等的影响因素。 平衡理论、塔板理论、纵向扩散理论、速率理论 块状液膜模型、分子顶替模型、定标粒子理论模型及最新的各种保留值预测理论 ２、技术发展 1)超临界流体色谱 超临界流体：物质处于临界温度和临界压力以上，既不是液体也不是通常的气体，而是单一相态的流体。 使用超临界流体作流动相的色谱法称为supercritical fluid chromatography, SFC 特点：具有气体的低黏度和高扩散系数，又具有液体的强溶解能力，参与溶质的分配作用，同时具有气相色谱和液相色谱的优点。 变更压力、温度等参数可以改变超临界流体的密度，即改变它的溶解能力、黏度和扩散系数，改变分离效能。 应用范围：难挥发、易热解、易氧化等特性的高分子和天然产物的分离和制备。 2)微型色谱 常规仪器，部件按比例缩小， 仪器的小型化， 便携式的色谱仪 色谱原理和仪器与微制造技术结合 部件和连接系统等环节进行重新设计 不仅是尺寸的缩小，而是技术革新 3)、高速气相色谱 分析速度更快 微填充柱 电子程序压力流量控制系统 耐高压的仪器气路系统 分析速度提高5-10倍，分辨率提高3-5倍。 4)高温气相色谱 难挥发的化合物(高沸点的脂肪烃) 温度超过300℃ 色谱柱： 聚酰亚胺，330℃ 聚硅氧烷 镀铝层 不锈钢内衬石英，过渡层 5)多维