大规模植物细胞培养生产药用.docVIP

3 　大规模植物细胞培养生产药用 成分 　　植物细胞的大量培养是利用植物细胞体系, 通过现代生物工程手段进行工业规模生产,以获 得各种产品的一门新兴的跨学科技术。首次提 出从植物细胞培养物中合成天然药物的是1956 年美国的Routier 和Nickell ,1967 年Kaul 和Staba 采用多升发酵罐对小阿米( Ammi visnaga) 进行了 细胞大量培养的研究,并首次用此方法得到了药 用成分呋喃色酮(Visnagin) 。七八十年代,植物 组织培养、植物原生质体培养等各种植物培养技 术与植物细胞培养技术共同发展,在培养基配 方、环境条件控制、悬浮培养技术等研究方面相 互借鉴、相互促进[1 ] ;而大规模培养技术方面,得 益于微生物发酵技术的飞速发展,各种各样的反 应器如气升式、气泡柱式、模式等反应器相继得 到应用,使得植物细胞大量培养的研究迅速得到 借鉴发展。 这些年来植物细胞培养技术主要致力于高 产细胞株选育方法、悬浮培养技术、多级培养和 固定化细胞技术、培养工艺优化控制、生物反应 器研制、下游纯化技术等方面的研究,并取得了 较大进展[2 ] 。 近几年有些技术用于植物细胞培养对提高 产物含量,降低成本有一定的作用。这些技术 有: (1) 发状根培养技术和冠瘿组织细胞培养技 术。发状根(Hairy root ) 和冠瘿组织(Crown gall tissue) 在离体培养时都具有激素自主、增殖较常 规细胞培养快、次生代谢物含量一般比悬浮培养 细胞高、且能合成某些悬浮培养细胞不能合成的 次生代谢物以及能引入外源基因表达等特点,从 而引起人们利用它们生产药用次生代谢物的重 视。如利用桔味薄荷(Mentha citrata) 冠瘿细胞生 产萜烯,洋地黄( Digitalis) 冠瘿细胞生产强心甙, 丹参冠瘿细胞生产丹参酮[3 ] ,长春花冠瘿细胞生 产吲哚生物碱[4 ] ,人参发状根培养生产人参皂甙, 长春花发状根培养生产长春碱,青蒿发状根 培养生产青蒿素[5 ] ,萝芙木发状根培养生产生物 碱[6 ]等等。(2) 两相培养技术[7 ] 。两相培养技术 是在培养体系中加入水溶性或脂溶性的有机物, 或者是具有吸附作用的多聚化合物(如大孔树脂 等) ,使培养体系形成上、下两相,细胞在水相中 生长与合成次生物质,然后分泌出来转移到有机 相中。这样不仅减少了产物的反馈抑制作用,使 产物含量提高,而且通过有机相的不断回收及循 环使用,有可能实现植物细胞的连续培养,使成 本降低。不少植物培养细胞已成功地建立了两 相培养系统,如Payne 等在培养的长春花细胞中 加入XAD - 7 大孔吸附树脂,可以使吲哚生物碱 的含量提高;在培养的花菱草悬浮细胞中加入一 种液体硅胶,可使血根碱的含量大大提高。 大规模植物细胞培养技术经过几十年的努 力研究,已取得很大的进展,有些药用植物种类 已实现工业化生产,如从希腊毛地黄( Digitalis lanata) 细胞培养物通过生物转化生产地高辛 (Digoxin) 、从日本黄连( Coptis japonica) 细胞培养 物中生产黄连碱(Coptisine) 、从人参根细胞中生 产人参皂甙等;相当种类的药用植物细胞大量培 养已达到中试水平,如长春花生产吲哚生物碱、 丹参生产丹参酮、青蒿生产青蒿素、红豆杉生产 紫杉醇、紫草生产萘醌、三七生产皂甙等等。目 前大多数植物细胞大规模培养生产药物距商业 化生产还有一定差距,主要是由于: (1) 植物细胞 的生长周期长,易污染。(2) 植物细胞对生物反 应器的设计装置要求较高。(3) 高产细胞株较难 获得[8 ] 。目前据报道只有20 多种植物的细胞培 养物,其次生产物含量超过原植物,原因被认为 是培养细胞的形态分化受到抑制,而大多数次生 产物要在分化了的细胞中产生。由于以上的问 题,加上与之相比,直接提取法成本很低,所以在 很大程度上限制了大规模植物细胞培养技术生 产药物走上商业化生产的步伐。但是,对一些不 易栽培、稀少、不能或难以化学合成、有很高应用 价值的药物,如紫杉醇,用这种方法开展研究进 行生产还是很有商业价值的,而且从长远和环境 保护的角度看,它应该有非常广阔的商业前景。 4 　转基因植物生产药物 最近十几年来,植物基因工程取得了相当大 的进展。用大肠杆菌、酵母等微生物发酵生产药用蛋白虽早已进入商品化生产的阶段,但仍有一 些问题尚未得到很好解决。随着植物基因工程 技术的发展和成熟,科学工作者们希望把药用蛋 白的生产从微生物转向植物,因为其有以下优 点: (1) 植物是真核生物,可在自身细胞内完成蛋 白质的糖基化等后加工过程,使生产的药物更有 利于人体吸收。(2) 微生物在生长过程中会产生 毒蛋白等有害的副产品,如纯化工艺不过关,将 会给服用药物