第4节 蛋白质共价结构.pptVIP

第4章 蛋白质的共价结构 1 蛋白质通论 1.1 形状和大小 按形状和溶解度分类： 纤维状蛋白质：角蛋白、丝蛋白、胶原蛋白 不溶于水和稀盐溶液；结构作用。 球状蛋白质： 溶解性较好；功能多样。 相对分子质量：6000到1x106 1.2 构象和组织层次 构型：具有相同结构式的立体异构体中取代基在空间的相对取向。 不同的构型间的转变需要共价键的断裂和重新形成。 构象：具有相同结构式和相同构型的分子在空间里可能的多种状态。 不同的构象间转变不需要共价键的断裂和重新形成。 蛋白质的天然构象：每一种蛋白质至少有一种构象在生理条件下是稳定的，并具有生物活性的构象。 结构层次： 一级结构 （1°） （primary structure) 二级结构 （2°） （secondary structure） 超二级结构 （supersecondary structure） 结构域 （structural domain） 三级结构 （3°） （tertiary structure） 四级结构 （4°） （quarternary structure） 1.3 蛋白质功能的多样性 催化 (酶) 调节 (激素、激活剂） 转运 （血红蛋白、膜转运蛋白） 贮存 （卵清蛋白） 运动 （肌动蛋白、肌球蛋白） 结构成分 （角蛋白、胶原蛋白） 防御和进攻 （免疫球蛋白、蛇毒的溶血蛋白） 2 蛋白质的一级结构 一级结构 （primary structure): 多肽链的氨基酸的序列。 主要连接键：肽键 2.1 肽键和肽 肽链：氨基酸通过肽键连接起来而形成的链。 2.2 肽的化学性质 双缩脲反应：肽和蛋白质特有的。 含有两个或两个以上的肽键化合物与CuSO4碱性溶液生成紫红色或蓝紫色的复合物。 用分光光度计测定蛋白质含量。 2.3 天然存在的活性肽 活性肽（active peptide）: 有许多分子量比较小的多肽以游离状态存在，通常都具有特殊的生理功能。 ? L-Leu-D-Phe-L-Pro-L-Val ? ? L-Orn L-Orn ? ? L-Val-L-Pro-D-Phe-L-Leu ? 短杆菌肽S(环十肽) ?由细菌分泌的多肽，有时也都含有D-氨基酸和一些非蛋白氨基酸。如鸟氨酸（Ornithine, 缩写为 Orn）。 CO-NH-CH-CO-NH-CH2-COOH 3 蛋白质一级结构的测定 ① 测定蛋白质分子中多肽链的数目 ② 拆分蛋白质的多肽链 ③ 断开多肽链内的二硫桥 ④ 分析每一多肽链的氨基酸组成 ⑤ 鉴定多肽链的N-末端和C-末端残基 ⑥ 裂解多肽链成较小的片段 ⑦ 测定个肽段的氨基酸序列 ⑧ 重建完整多肽链的一级结构 ⑨ 确定半胱氨酸残基间形成的S-S交联桥位置 3.1 测定蛋白质分子中多肽链数目 蛋白质的N-末端或C-末端残基的摩尔数和蛋白质的相对分子质量 3.2 拆分蛋白质的多肽链和断开多肽链内的二硫桥 ①非共价键： 血红蛋白（四聚体） 断裂：8mol/L尿素或6 mol/L盐酸胍 ②二硫键：链内或链间 还原：过量的β- 巯基乙醇（pH8~9） 保护巯基：烷基化试剂（碘乙酸） 3.4 N末端和C末端氨基酸残基的鉴定 (1) N末端 ① 2，4-二硝基氟苯（DNFB)法*** ② 丹磺酰氯（DNS)法 ③ 苯异硫氰酸酯（PITC)法***** ④ 氨肽酶法 ② 丹磺酰氯法（DNS法） (2) C末端 ①还原法 ②肼解法 ③ 羧肽酶法 3.5 多肽链的部分裂解和肽段混合物的分离纯化 ① 酶裂解法**：（酶的专一性） A 胰蛋白酶( Trypsin）： R1=赖氨酸、精氨酸 但R2=脯氨酸　抑制 B 胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）： R1=苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　但R2=脯氨酸　抑制 C 嗜热蛋白酶： R2=亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸 D 胃蛋白酶: R1和R2=苯丙氨酸、亮氨酸、色氨酸、酪氨酸 3.6 肽段氨基酸序列的测定