《甾体激素类》ppt课件.ppt

（4）影响因素 1. 结构的影响 C11= O＞ C11－OH C21－OH＞ C21-酯 2. 溶剂、水分的影响 含水量大时使呈色速度减慢，当含水量不超过5%时，对结果几无影响。故以无醛乙醇为溶剂。 4、碱的种类及加入顺序：以氢氧化四甲基铵的结 果最佳，加入顺序： 碱试液 四氮唑盐 皮质激素溶液 3. 温度与时间：25 ℃暗处反应40-45min。 5. O2与光线的影响：避光，隔绝空气or充N2 6. 干扰物的影响：测定油膏、冷霜等制剂应先分离后测定 肾上腺皮质激素、 雄性激素和蛋白同 化激素、孕激素 C3－酮基 （1） 原理 异烟腙（黄） 酮基 异烟肼 - 3 C HCl （缩合） 1. 异烟肼比色法 （三）比色法 对照品法 55 ℃ 异烟肼 挥去乙醇 对照液 供试液 A 暗45min （3）讨论 A. 反应专属性：具有△4 – 3 – 酮基的甾体激素在室温不到1h即可定量的与异烟肼反应，本法对△4 – 3 – 酮基具有一定的专属性。 C3-酮基＞ C20-酮基、C17-酮基 C11-酮基不反应 B. 溶剂的选择 异烟肼盐酸盐→甲醇、乙醇 C.水分、温度、O2与光线的影响 含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓ 溶剂不挥发、不吸收水分时→ O2与光线无影响 D.酸的种类和浓度 酸与异烟肼摩尔比2：1可获得最大吸收值 异烟肼0.00365 mol/L HCl 0.0074 mol/L H2SO4 0.0037 mol/L 醋酸 4.4 mol/L （1）原理 λmax=465 λmax=515 雌激素 3. Kober反应比色法 △ △ 桃红 黄色 雌激素 2 O H 乙醇 - 4 2 SO H λmax=465 黄色 λmax=515 红色 雌二醇-3-甲醚 λmax=465 λmax=515 反应条件 双变色，测定结果重现性不好 杂质干扰（赋型剂、稳定剂有干扰） 存在的问题 A环是芳环，在C2或C3有含氧取代 D环的C17有含氧取代（－OH,-C=O） C13必须有角甲基 （二）UV法 △４-3-酮 240nm（±） 肾上腺皮质激素 雄性激素和蛋白同化激素 孕激素、口服避孕药 苯环 280nm（±） 雌激素 示例：醋酸可的松片的含量测定 （1）配制供试液（2）测定238nm的吸光度（3）按 为390计算 醋酸可的松的紫外吸收光谱 （一）HPLC法 USP、BP、JP均采用 RP－HPLC（大多内标法） 特点 ：用样量少，灵敏度高，分离效果好，测定速度快。 示例：醋酸泼尼松龙的含量测定色谱条件：固定相：ODS，流动相 甲醇-水 （70:30），检测波长240nm， 内标物 醋酸氟轻松 系统适用性试验：N 3000，R符合规定。 方法名称 测定基团 主要试剂 甾体类别 高效液相色谱法 Δ4-3=O 或芳香A环 C18柱 甲醇（乙腈）－水 各类甾体激素 紫外分光光度法 Δ4-3=O 或Δ1，4-3＝O A环为芳香环 溶剂（无水乙醇、乙醇、甲醇） 肾上腺皮质激素 雄性激素 雌性激素 口服避孕药 四氮唑比色法 C17－α－醇酮基 三苯四氮唑盐 四氮唑盐 氢氧化四甲基铵 肾上腺皮质激素 异烟肼比色法 Δ4-3=O 或Δ1，4-3＝O 异烟肼 盐酸 肾上腺皮质激素、 雄性激素、孕酮 Kober比色法 C3 －酚OH A环为芳香环 硫酸、硫酸亚铁铵、过氧化氢、苯酚 雌性激素 练习与思考 [A型题] 1. 醋酸地塞米松的鉴别方法是 A.三氯化铁反应 B. 水解反应 C. 柯柏反应 D.与碱性酒石酸铜试液反应 E. 双缩脲反应 2. 丙酸睾酮《中国药典》规定的含量测定方法为 A.非水溶液滴定法 B.溴酸钾法 C.HPLC法 D.紫外分光法 E.旋光法 3．甾体激素类药物的结构中能和 四氮唑盐发生显色反应的基团 A. 酚羟基 B. 活泼次甲基 C. 甲酮基 D. C17 -α-醇酮基 E. 酮基 4. 能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰 紫色的药物是 A．雌二醇 B．黄体酮 C．醋酸可的松 D．苯丙酸诺龙