聊城大学农学院动物免疫学课件第十六章 免疫标记技术.ppt

主讲：路建彪;1. 免疫技术是利用Ag-Ab反应进行的检测方法，特点是具有高度的特异性和敏感性。 2. 如将Ag或Ab用标记物(如荧光素、酶、放射性同位素等)进行标记，则在与标本中的相应Ab或Ag反应后，可以不必测定Ag-Ab复合物本身，而测定复合物中的标记物，通过标记物的放大作用，进一步提高了免疫技术的敏感性。; 　　 ;第一节 荧光抗体技术 （fluorescent antibody technique）;一、荧光现象与荧光物质 ;荧光分子的辐射能力在受到激发光较长时间的照射后会减弱甚至猝灭； 这是由于激发态分子的电子不能回复到基态; 所吸收的能量无法以荧光的形式发射。;许多物质都可产生荧光现象，但并非都可用作荧光色素。 只有那些能产生明显荧光并能作为染料使用的有机化合物才能用作免疫荧光色素或荧光染料。;;性质稳定，可长期保存； 最大吸收光波长为 570nm； 最大发射光波长为595～600nm； 呈现橘红色荧光。;最大吸收光波长为 550nm， 最大发射光波长为620nm， 呈现橙红色荧光， 与FITC的翠绿色荧光对比鲜明， 可配合用于双重标记或对比染色。;二、抗体的荧光素标记;（1）应具有能与Ab分子形成共价健的化学基团； （2）与蛋白质结合后，仍能保持较高的荧光效率； （3）荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明； （4）与Ab结合后不影响Ab的生化与免疫性质； （5）标记方法简单、安全无毒； （6）与蛋白质的结合物稳定，不易解离，易于保存。;三、免疫荧光显微技术;（一）标本的制作;（三）荧光显微镜检查;（四）常用的实验类型;2.间接荧光染色法 ;缺点：操作流程长、干扰因素多。 ;3.补体荧光染色法;该技术是以酶标记的Ab或Ag为主要试剂的方法;一、原理;①灵敏度高，特异性强； ②可定性、定量检测可溶性抗原和抗体，适用于普查； ③试剂来源广，稳定，保存时间长，且无同位素污染； ④结果可肉眼半定量，也可用仪器定量检测，且仪器价格较低廉，可在大多数实验室开展； ⑤操作简便，易于掌握和使用，且重复性好； ⑥可用于定位组织细胞上的抗原或抗体成分。;第三节 放射免疫测定;优点：;Ag* + Ab ?Ag*-Ab （F） （B） + Ag ? Ag-Ab ;RIA测定原理的定量示意图;谢谢大家!