发酵工程 一、微生物菌种的衰退 二、菌种的复壮 三、菌种的保藏 第四节 种子的扩大培养.pptVIP

③ 菌种生长的条件要求没有得到满足，或是遇到不利的条件，或是失去某些需要的条件。 ② 菌种保藏方法不当。 各种菌种的保藏法对阻止菌种变异的效果不尽相同，用效果较差的条件保藏菌种时，菌种就较易发生退化。 保藏操作不当也会影响保藏效果，会影响到菌种的变异。 2. 防止菌种衰退的措施 一、微生物菌种的衰退 （1）控制传代次数 （2）创造良好的培养条件 （3）利用不易衰退的细胞传代 （4）采用有效的菌种保藏方法 尽量避免不必要的移种和传代，并将必要的传代降低到最低限度，以减少细胞分裂过程中所产生的自发突变几率。 如：在赤霉素生产菌G.fujikuroi的培养基中，加入糖蜜、天冬酰胺、谷氨酰胺、5‘-核苷酸或甘露醇等丰富营养物时，有防止衰退效果。 对于放线菌和霉菌，菌丝细胞常含有几个细胞核，因此用菌丝接种就易出现衰退，而孢子一般是单核的，用于接种就可避免这种现象。 二、菌种的复壮 纯种分离 通过寄主体进行复壮 淘汰已衰退的个体 狭义的复壮仅是一种消极的措施，指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和测定典型性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状的相应措施； 广义的复壮是一项积极的措施，指在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性状的测定工作，以期从中选择到自发的正变个体。 如:对S.microflavus”5406”农用抗生菌的分生孢子采用-10—30℃的低温处理5-7天,使其死亡率达到80%左右,结果会在抗低温的存活个体中留下未退化的个体,从而达到了复壮的效果。 三、菌种的保藏 一个优良的菌种被选育出来以后，要保持其生产性能的稳定、不污染杂菌、不死亡，这就需要对菌株进行保藏。尽量减少传代次数，防止菌种衰退。 1. 菌种保藏的原理 菌种保藏主要是根据菌种的生理、生化特性，人工创造条件使菌体的代谢活动处于休眠状态。 保藏时，一般利用菌种的繁殖体和休眠体（孢子、芽胞等），创造最有利于休眠状态的环境条件，如低温、干燥、隔绝空气或氧气、缺乏营养物质等，使菌体的代谢活性处于最低状态，同时也应考虑到经济、简便方法。 由于微生物种类繁多，代谢特点各异，对各种外界环境因素的适应能力不一致，一个菌种选用何种方法保藏较好，要根据具体情况而定。 2. 菌种保藏方法 7种常用菌种保藏方法的比较 方法 主要措施 适宜菌种 保藏期 评价 冰箱保藏法 （斜面） 低温（4℃） 各大类 约1～6月 简便 冰箱保藏法 （半固体） 低温（4℃），避氧 细菌，酵母菌 约6～12月 简便 石蜡油封藏法* 低温（4℃），阻氧 各大类** 约1～2年 简便 甘油悬液保藏法 低温（－70℃），保护剂（15～50％甘油） 细菌，酵母菌 约10年 较简便 砂土保藏法 干燥，无营养 产孢子的微生物 约1～10年 简便有效 冷冻干燥保藏法 干燥、低温、无氧，有保护剂 各大类 5~15年 繁而高效 液氮保藏法 超低温（－196℃），有保护剂 各大类 15年 繁而高效 *用斜面或半固体穿刺培养物均可，一般置于4℃下。 **对于可利用石油作碳源的微生物不适宜。 3. 菌种保藏的注意事项 菌种在保藏前所处的状态 菌种保藏所用的基质 操作过程对细胞结构的损害 4. 主要的菌种保藏机构 ① 从事原始菌株的保藏，进行有关保藏的研究； ② 提供保藏菌种的品种目录，定期（或不定期）出刊沟通信息； ③ 提供菌种，促进微生物菌种的交流。 作用： 国内 1979年7月，我国在国家科委和中国科学院主持下，召开了第一次全国菌种保藏工作会议，在会上成立了中国微生物菌种保藏管理委员会（China Committee for Culture Collection of Microorganisms，CCCCM），下设六个菌种保藏管理中心： 1、普通微生物菌种保藏管理中心 真菌、细菌 病毒 中国科学院微生物研究所（北京） 中国科学院武汉病毒研究所（武汉） 2、农业微生物菌种保藏管理中心 中国农业科学院土壤肥料研究所（北京） 3、工业微生物菌种保藏管理中心 轻工业部食品发酵工业科学研究所（北京） 4、医学微生物菌种保藏管理中心 真菌 中国医学科学院皮肤病研究所（南京） 细菌 卫生部药品生物制品检定所（北京） 病毒 中国医学科学院病毒研究所（北京） 5、抗生素菌种保藏管理中心 中国医学科学院抗生素研究所（北京） 四川抗生素工业研究所（成都） 华北药厂抗生素研究所（石家庄） 新抗生素菌种 生产用抗生素菌种 6、兽医微生物菌种保藏管理中心 农业部兽医药品监察所研究所（北京） 国外 1、美国典型菌种收藏所 American Type Culture Collectio