植物生理学实验--.pptVIP

四、实验步骤 1.提取：称取果实5g 放入研钵中，加少许石英砂研磨成匀浆，用少量蒸馏水冲洗至 50ml三角瓶中，再加水至30ml左右，置于80℃水浴中浸提30min，每隔5min搅拌1次，取出冷却后过滤，滤液与冲洗残渣滤液合并，定容 50ml 。 2.测定：取50ml三角瓶3只，分别装入样品提取液10ml，1%酚酞2滴，用0.1mol·L-1 NaOH 滴定至微红色，摇动1min不褪色即为滴定终点，记录消耗碱液的数量。 五、实验结果 样品 名称 样品重 （g） （W） 稀释总量（ml） (V1) 测定时所取样液毫升数 (V2) 滴定时消耗NaOH毫升数（V3） 折算系数及酸的种类（K） 有机酸含量（%） 样品中有机酸含量测定结果 式中： W ——样品重量， g 。 C —— NaOH 浓度， 0.1 mol·L-1 。 K ——换算系数：苹果酸为 67 ，酒石酸为 75 。 V1 ——提取时样液总量，ml 。 V2 ——测定时样液用量，ml 。 V3 ——消耗 NaOH 液量，ml 。 六、注意事项 1.滴定时，滴定管下端气泡要排除。 2.把握滴定终点。 七、思考题 1.分析比较不同果实或不同成熟度的果实有机酸含量的差异原因？ 实验十四 植物组织中丙二醛含量的测定 验证性实验 （3学时） 一、实验目的 掌握丙二醛含量测定的分光光度法。 了解丙二醛含量在植物衰老生理和抗性生理中的意义。 二、实验原理 植物组织中的丙二醛(MDA) 在酸性条件下加热可与硫代巴比妥酸(TBA) 产生显色反应，反应产物为粉红色的3，5，5一三甲基恶唑2，4一二酮(Trimet—nine)。该物质在532nm波长下有吸收峰。由于硫代巴比妥酸也可与其它物质反应，并在该波长处有吸收，为消除硫代巴比妥酸与其它物质反应的影响，在丙二醛含量测定时，同时测定600nm下的吸光度，利用532nm与600nm下的吸光度的差值计算丙二醛的含量。 三、实验器材 材料：白菜叶片。 试剂：0.05mol?L-1 pH7.8磷酸钠缓冲液；石英砂； 5％三氯乙酸溶液：称取5g三氯乙酸，先用少量蒸馏水溶解，然后定容到100ml； 0.5％硫代巴比妥酸溶液：称取0.5g硫代巴比妥酸，可先用1mol的NaOH溶解，再用10％三氯乙酸溶解，定容至100ml，即为0.5％硫代巴比妥酸的10％三氯乙酸溶液。 仪器：分析天平（1/万）、分光光度计、离心机、水浴锅、 研钵、剪刀、镊子、冰箱、移液管 四、实验步骤 1.丙二醛的提取：取0.5g样品，加入2ml预冷的0.05mol·L-1 pH7.8的磷酸缓冲液，加入少量石英砂，在经过冰浴的研钵内研磨成匀浆，转移到5ml刻度离心试管，将研钵用缓冲液洗净，清洗也移入离心管中，最后用缓冲液定容至5ml。在4500 rpm离心10min。上清液即为丙二醛提取液。 2.丙二醛含量测定：吸取2 ml的提取液于刻度试管中，加入0.5％硫代巴比妥酸的5%三氯乙酸溶液3ml，于沸水浴上加热10min，迅速冷却。于4500 rpm离心10min。取上清液于532、600nm波长下，以蒸馏水为空白调透光率100%，测定吸光度。 五、实验结果 丙二醛含量（nmol·g-1 FW）= (A532—A600) ×V1×V 1.55×10-1×W×V2 式中：A为吸光度；V1为反应液总量(5m1)；V为提取液总量(5ml)；V2为反应液中的提取液数量(2ml)；W为植物样品重量(0.5g)；1.55×10-1为丙二醛的微摩尔吸光系数（在1升溶液中含有1μmol丙二醛时的吸光度）。 六、注意事项 1.0.1～0.5％的三氯乙酸对MDA—TBA反应较合适，若高于此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高； 2.MDA—TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴10～15min之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降； 3.如用MDA作为植物衰老指标，首先应检验被测试材料提取液是否能与TBA反应形成532nm处的吸收峰。否则只测定532、600nm两处A值，计算结果与实际情况不符，测得的高A值是一个假象。 七、思考题 1.通过丙二醛含量测定能够解决什么理论和实际问题？ 2.什么时候植物会发生严重的膜脂过氧化作用？简述其过氧化作用过程。 3.说明膜脂过氧化作用的对植物的效应。 4.丙二醛反应液为什么加热时间过长会影响测定结果？ 5.如果可溶性糖含量影响丙二醛含量的测定，你有什么办法消除其影响？ * 一、实验目的 掌握测定种子生活力的方法。 了解测定种子生活力多种方法的特点。 理解种子生活力测定方法的一般原理。 二、实验原理 红墨水染色法： 植物活细胞的原生质膜具有选择透性，某些染料分子（如红墨水）不能透过，因而不能将种胚