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酶pH影响实验中缓冲液配制改善与优化组合 　　摘要：通过探讨不同pH缓冲液配制的准确性及其对酶活性实验的影响；按照分析化学和生物化学实验中经典的缓冲液的配制方法进行配制，使用pH计进行测定，并利用配制的缓冲液立即按生物化学实践指导方法进行酶活性的影响实验；结果发现缓冲液的pH值随环境和人为因素等改变其值有较大变化，做出来的实验现象也会发生改变，实验结果难以控制；提出了通过改善pH缓冲液的配制方法，使不同pH缓冲液的优化组合，降低环境和人为因素对实验结果影响的结论，以使学生的实验结果与教材相一致增加学生的学习信心。 　　关键词：酶；pH缓冲液；配制；改善；优化 　　中图分类号：G712 文献标识码：A 文章编号：1672-5727（2012）08-0136-02 　　生物化学实验是生物化学教学的重要的组成部分，通过实验不仅能使学生掌握基本的生物化学实验操作技能，加深对生物化学理论知识的理解和掌握，增强分析问题、解决问题的能力，同时，又可减少课程内容的抽象性、复杂性和枯燥性，使学生乐于学习。在pH对酶促作用影响的实验中，主要验证反应体系中不同pH值对酶活性的影响以证明pH6.8是淀粉酶的最适pH值。若在实验结果中出现与书本理论知识不同的实验现象，目前，对中等卫生职业学校的学生来说，就会影响他们学习操作技能的信心，教师对实验结果也难以作出合理的解释，实验目的也难以达到。其中，对实验影响最关键的因素是反应体系的pH值，而实验教材中所标示的不同pH缓冲液的配制方法，笔者认为值得商榷。在教学中，通过改变不同的pH缓冲液而进行优化组合，有利于实验的开展，可取得满意的实验效果。 　　材料与方法 　　材料 磷酸氢二钠，柠檬酸，淀粉，碘，碘化钾，甘氨酸，氢氧化钠；pH计（PHS-25型数显酸度计，上海雷磁仪器厂），复合电极（E-201-C型，上海精密科学仪器公司）。 　　方法 pH5.0缓冲液、pH6.8缓冲液、pH8.0缓冲液及其他试剂的配制方法参照《生物化学实践指导》；配制pH5.0缓冲液：取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液515mL、0.1mol/L柠檬酸溶液485 mL混合而成；配制pH6.8缓冲液：取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液772mL、0.1mol/L柠檬酸溶液228 mL混合而成；配制pH8.0缓???液：取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液972mL、0.1mol/L柠檬酸溶液28 mL混合而成。 　　改善和优化所需pH缓冲液的配制 配制pH4.0缓冲液：取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液385.5mL、0.1mol/L柠檬酸溶液614.5 mL混合，经pH计校正；配制pH6.8缓冲液：取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液772mL、0.1mol/L柠檬酸溶液228 mL混合，经pH计校正；配制pH10.0缓冲液：0.2mol/L甘氨酸溶液250mL、0.2mol/L氢氧化钠160 mL混合，经pH计校正。 　　操作 缓冲液pH的测定方法参照pH计的说明书进行。接通电源，仪器预热30分钟。仪器使用前，先要标定（定位），其方法如下：把选择开关旋钮调到pH档；调节温度补偿旋钮，使指示温度与溶液温度相同；把清洗并吸干过的电极插入已知pH值的标准缓冲溶液中；调节定位旋钮，使显示读数与该标准缓冲溶液pH值一致（如6.86）。用蒸馏水清洗电极，重新分别定位pH值4.00、9.18标准溶液；溶液pH值测量：仪器定位后即可测量被测溶液，定位调节旋钮不再变动；先用蒸馏水清洗电极头部，再用滤纸吸干，把电极浸入被测溶液中，混合均匀。在显示屏上读出被测溶液的pH值。pH对酶活性的影响的操作按实践指导进行。 　　结果 　　从表1数据可知，按生物化学实践指导配制的缓冲溶液pH值与书本所标示的不一样，甚至差别较大，提示该配制缓冲溶液的方法有一定缺陷。 　　从图1实验结果可知，pH5.0试管为蓝色，pH6.8试管为无色（或红色），pH8.0试管为棕红色，学生在实验中做出pH6.8试管的颜色与pH8.0试管的结果差别较少，难以明确判断pH6.8为最适pH值。 　　从图2实验结果可知，pH4.0试管为蓝色，pH6.8试管为无色（或红色），pH10.0试管为蓝色，学生在实验中即使取液量有较大误差，反应体系的pH值仍能做出满意结果，易判断pH6.8为最适pH值。 　　讨论 　　对按《生物化学实践指导》中的方法所配制的不同pH缓冲液经pH计测定，发现溶液pH值与书本标记的pH值不符，说明按教材简单和机械地配制有一定误差，其配制方法是传统经典方法，本身没有问题，但受到多种因素的影响，不能保证每批次配制的pH值基本一致，应进行改善。主要有两种因素，一是各种试剂质量，不同厂家生产的试剂虽然都是分析纯，但质量有差别，不能保证每一个厂家生产的同一种试剂质量一样；二是蒸馏水pH值的影响，