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叶绿素降解菌筛选与应用 　　摘要：以叶绿素为培养基成分，在不添加无机盐的条件下，从土壤中分离筛选得到一株能降解叶绿素的菌株；经过形态学鉴定，确定它为曲霉属中的一种，菌株命名为ＧＬＨＺＢ３１９，保藏在中国典型培养物保藏中心内，保藏编号为ＣＣＴＣＣ Ｎｏ： Ｍ２０１１１０１。在温度为３０ ℃、摇床转速１００ ｒ／ｍｉｎ、自然ｐＨ、ＧＬＨＺＢ３１９菌株接种孢子量为１．０×１０６个／ｍＬ的培养条件下，把１００ ｍＬ的叶绿素水溶液培养３ ｄ，溶液的吸光度值由０．３１０降解到０．００２，降解率达到９９％。 　　关键词：叶绿素；降解菌；筛选 　　中图分类号：Ｑ９４５．１１；Ｑ９４８．１２＋２．３；Ｑ９３９．９７ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）14－2992-04 　　Screening and Application of Chlorophyll Degradation Bacterium 　　ＣＨＥＮ Ｚｈｉ－ｌｉａｎｇ，ＬＩ Ｈａｉ－ｙｕｎ，ＬＩ Ｚｉ－ｙｕａｎ，ＨＡＯ Ｚａｉ－ｂｉｎ 　　（Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｇｕｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Tｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕｉｌｉｎ ５４１００４，Ｇｕａｎｇｘｉ，Ｃｈｉｎａ） 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔａｋｉｎｇ ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ ａｓ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ， ａｎｄ ａｄｄｉｎｇ ｎｏ ｉｎｏｒｇａｎｉｃ， ａ ｓｔｒａｉｎ ｃａｐａｂｌｅ ｏｆ ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｏｉｌ． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ， ｉｔ ｂｅｌｏｎｇｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｇｅｎｕｓ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ Ｍｉｃｈ．ｅｘ Ｌｉｎｋ：Ｆｒ．． Ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ｗａｓ ｎａｍｅｄ ＧＬＨＺＢ３１９， ａｎｄ ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Cｏｌｌｅｃｔｓ ｎｕｍｂｅｒ： ＣＣＴＣＣ Ｎｏ： Ｍ２０１１１０１）． Ａｔ ３０ ℃， ｓｈａｋｉｎ??? ｓｐｅｅｄ １００ ｒ／ｍｉｎ， ｎａｔｕｒａｌ ｐＨ， ｗｉｔｈ ＧＬＨＺＢ３１９ ｎａｔｕｒａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｑｕａｎｔｉｔｙ １.0×１０６ ｉｎｄ．／ｍＬ， ｔｈｅ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ １００ ｍＬ ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｆｒｏｍ ０．３１０ ｔｏ ０．００２ ａｆｔｅｒ ３ ｄ， ｗｉｔｈ ａ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ９９％． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ； ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ； ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ 　　叶绿素广泛存在于植物体内及藻类、光合细菌中，分布的部位主要是内囊体膜；叶绿素类型主要包括叶绿素ａ和叶绿素ｂ，其中叶绿素ａ占的比例较大，通常叶绿素ａ∶叶绿素ｂ＝３∶１，它们难溶于水，但能溶于乙醇、丙酮和石油醚等有机溶剂［１，２］。叶绿素是叶绿酸的二醇酯，是由叶绿酸（镁卟啉衍生物、二元羧酸）的两个羧基分别与甲醇（ＣＨ4Ｏ）和植醇（Ｃ２０Ｈ40Ｏ）发生酯化反应所形成的，是对光、热、酸等环境条件不稳定的物质［３－６］。叶绿素ａ和叶绿素ｂ在结构上的差别仅在于第二吡咯环上的一个－ＣＨ３被－ＣＨＯ所取代［７，８］。 　　在植物界有７ ０００多种植物可供人类食用，在民间约有５ ０００种草药用来治疗日常的各种疾病，在中药材中有４０％是由绿色植物提供。现代食品和药品的提取需要脱除叶绿素［９］，目前在工业生产上脱除叶绿素的方法主要有：①物理吸附法，包括大孔树脂吸附法和活性炭吸附法；②化学氧化法，包括双氧水氧化法或次氯酸钠氧化法；不过这两类方法都存在一定的局限性。而采用生物工程技术方法降解叶绿素是环境友好型的处理方法，是未来发展的方向［１０］。 　　试验通过微生物培养，利用叶绿素为培养基成分，在未添加无机盐的情况下，从土壤中分离出一株能够降解叶绿素的菌株，经显微形态观察分析，鉴定为曲霉属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ Ｍｉｃｈ．ｅｘ Ｌｉｎｋ：Ｆｒ．）［１１］，命名为ＧＬＨＺＢ３１９菌株，并保藏在中国典型培养物保藏中心里，保藏编号ＣＣＴＣＣ Ｎｏ：Ｍ２０１１１０１。 　　１ 材料与方法 　　１．１ 材料 　　１．１．１ 试剂与用品 主要试剂如丙酮、碳酸钙、葡萄糖、２０％甘油等都为化学纯；琼脂为食品级，马铃薯为市售；叶绿素为桂林理工大学化学与生物工程学院实验室从中华猕猴桃（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｃｈ