曲美他嗪对大鼠放射性心肌损伤后IL—10表达影响.docVIP

曲美他嗪对大鼠放射性心肌损伤后IL—10表达影响 　　[摘要] 目的 探索曲美他嗪对放射性心肌损伤的保护效果及其机制。 方法 将45只SD大鼠随机分为正常对照组（C组）、单纯照射组（X组）、曲美他嗪治疗组（T组），每组15只，其中X组、T组给予X线10 Gy/d，照射3 d，T组给予曲美他嗪灌胃处理。大鼠照射完毕处死后测定血清cTnI 浓度、心肌组织IL-10 mRNA及蛋白的表达。结果 X组与C组比较，血清cTnI浓度、心肌组织IL-10 mRNA及蛋白的表达均明显升高（P 　　[关键词] 放射性心肌损伤；曲美他嗪；白介素10；大鼠 　　[中图分类号] R-332 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）12（c）-0007-04 　　随着纵隔及胸腔等部位恶性肿瘤放射治疗的增加，放射性心肌损伤（radiogenic myocardial damage）已成为不可忽视的问题，心脏常因过量的电离辐射发生放射性损伤，可表现为心律失常、冠心病、心包炎、心肌炎等，是放射治疗的严重并发症，胸部放疗5～10年后，放射性心肌损伤发生率达10%～30%[1]。近10年来，随着心脏介入手术的广泛开展，患者单次或多次长时间接受大量X射线照射的可能性增加，亦成为引起放射性心肌损伤的原因之一。虽然有报道称丹参、黄芪、依那普利等能够减轻放射性心脏损伤，但其只能在一定程度上控制损伤程度[2-3]，仍未找到更有效的防治放射性心肌损伤的方法。曲美他嗪（trimetazidine，商品名万爽力）自问世后便获得广泛关注，最初在临床上应用于改善冠心病患者的心肌供血，后有研究者发现[4]，其具有改善心肌代谢、增加心肌能量供应的功能，对心肌细胞具有独特的保护作用。曲美他嗪对放射性心肌损伤的影响如何目前尚未见报道，因此，本研究拟建立小鼠放射性心肌损伤模型并探索曲美他嗪对经放射后心肌细胞损伤的影响及其机制，为放射性心肌损伤的防治提供新思路和理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料及试剂 　　4MV-X 线直线加速器（英国），盐酸曲美他嗪[施维雅（天津）制药有限公司，国药准字，肌钙蛋白I（cTnI） ELISA试剂盒（RD，USA），ACS180型全自动化学发光免疫分析仪（Bayer 公司，德国），TRNzol-A+总RNA提取试剂（天根，中国），RevertAidTM FistStrand cDNA Synthesis kit（Fermentas???立陶宛），Fase Start Universal SYBR Green Master（Rox，USA），TNF-α mRNA、GAPDH mRNA引物（生工，中国），兔抗鼠IL-10单抗（Santa Cruz，USA），羊抗兔荧光二抗（LI-COR，USA），GAPDH单抗（碧云天，中国），荧光二抗（KPL，USA），蛋白Marker（Fermentas，立陶宛），Step-one 荧光定量基因扩增仪（ABI、美国），Odessay双色红外激光成像系统扫描仪。 　　1.2 实验动物 　　1.2.1 动物分组 选择健康雄性SD大鼠45只，体重200～250 g（广西医科大学实验动物中心提供）。随机分为正常对照组（C组）、单纯照射组（X组）、曲美他嗪治疗组（T组），每组15只。 　　1.2.2 照射方法 X组、T组腹腔内注射戊巴比妥钠40 mg/kg，动物麻醉固定后直线加速器10 Gy/d照射3 d，总放射剂量为30 Gy，面积4 cm×4 cm（全胸），剂量率为1.5 Gy/min，距离0.5 m。 　　1.2.3 给药方式 T组大鼠于照射前3 d开始给予曲美他嗪10 mg/（kg·d）溶于生理盐水3 ml，吸入注射器接大鼠灌胃针插至大鼠胃部注射给药，照射期间以相同剂量曲美他嗪灌胃；X组则以相同量的生理盐水采用与T组相同方法灌胃处理。 　　1.2.4 标本取材 实验期间无大鼠死亡，所有大鼠均于照射3 d后处死。腹腔内注射戊巴比妥钠40 mg/kg麻醉后开胸，下腔静脉取血5 ml，离心取上清以备ELISA检测cTnI；取出心脏组织快速置入液氮冻存，用于检测IL-10 mRNA及蛋白。 　　1.3 实验方法 　　1.3.1 血清cTnI 检测 采用Bayer公司ACS180型全自动化学发光免疫分析系统及双抗体夹心法cTnI测定试剂盒，以免疫发光法检测小鼠血清cTnI水平。具体步骤：取待测血浆标本100 μl装入反应杯，加入100 μl吖啶酯标记抗cTnI抗体于37℃温育2.5 min，加入200 μl总cTnI固相试剂（与磁性颗粒共价结合的单克隆抗cTnI 抗体）并温育5 min，用去离子水洗涤以分离反应相，最后加入300 μl试剂1与试剂2（化学发