枇杷清热养颜颗粒两种主要活性成分质量控制研究.docVIP

枇杷清热养颜颗粒两种主要活性成分质量控制研究 　　[摘要] 目的 建立高效液相色谱法同时测定枇杷清热养颜颗粒中绿原酸和黄芩苷的含量。 方法 Agilent SB-C18柱，流动相：甲醇-0.2%磷酸水溶液（52∶48）；流速：1.0 ml/min；检测波长：324 nm；柱温：室温。 结果 绿原酸线性范围为0.86～41.28 mg/L，平均回收率为100.14%（RSD=1.06%），回归方程为Y=4028.2X-13.106，r=0.9999；黄芩苷在0.78～41.13 mg/L范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=3430.2X+119.99（r=0.9992），平均回收率为100.06%（RSD=1.09%）。 结论 此方法简便可靠，结果稳定，重复性好，可用于枇杷清热养颜颗粒中绿原酸和黄芩苷的含量测定。 　　[关键词] 枇杷清热养颜颗粒；绿原酸；黄芩苷；高效液相色谱法 　　[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）10（a）-0073-03 　　枇杷清热养颜汤是由南昌市中西医结合医院张海峰等名老中医根据古方“枇杷清肺饮”（载于《外科大成》卷三[1]），结合自己多年的临床经验总结而成，在治疗寻常痤疮方面具有独特的疗效。该方作为重要传统汤剂在该院临床中已被使用了30余年，临床病例达数万人。其疗效确切、效果显著、服用安全、不良反应少，深受广大患者的认可。枇杷清热养颜颗粒（医院制剂）是在未改变枇杷清肺饮协定处方，利用现代设备不改变其原物质基础上开发的纯中药制剂。处方是由枇杷叶、丹参、黄芩、黄连、金银花、紫草、桑白皮、皂角刺、重楼、白花蛇舌草、甘草等11味中药材组成，具有清肺胃热、凉血解毒的功效，用于粉刺、痤疮、酒糟鼻等疾病症属肺胃积热者，其中金银花清热解毒、凉散风热，黄芩清热燥湿、除火解毒，均为该组方中起主要药理作用的组分[2-3]，但枇杷清肺饮协定处方为水煎剂，保存周期短、稳定性较差[4]，更重要的是暂未建立其质量标准，无法保证疗效。本研究参考已有的关于黄芩苷和绿原酸的含量测定方法[5-6]，利用高效液相色谱法建立枇杷清热养颜颗粒中黄芩苷和绿原酸的质量控制方法。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器与试药 　　Agilent1200高效液相色谱仪（四元泵，VWD 检测器），Agilent Chemistation 化学工作站， AE163电子分析天平， UV-2101紫外分光光度计、KQ3200DE超声清洗仪。 　　黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110715-200514），绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110753-200413），枇杷清热养颜颗粒批号：2011 1013（自制）。甲醇为色谱纯；水为超纯水；磷酸为分析纯。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent SB-C18（250 mm×4.6，5 μm）；流动相：甲醇-0.2%磷酸水溶液（52∶48），流速：1 ml/min；柱温：30℃；检测波长：324 nm；进样量：10 μl；外标法。 　　1.2.2 混合对照品储备液的制备 分别精密称取绿原酸和黄芩苷对照品适量，加甲醇制成混合对照品溶液，其中，绿原酸浓度为0.086 mg/ml，黄芩苷浓度为0.098 mg/ml。 　　1.2.3 供试品溶液的制备 取本品约0.6 g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70%乙醇50 ml，称重，超声处理40 min，放冷，补重，滤过，取续滤液2 ml，置10 ml量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，即得。 　　1.2.4 阴性对照液的制备 按处方配制缺绿原酸、黄芩苷的阴性样品， 按“1.2.3”项下的制备方法制得阴性对照液。 　　2 结果 　　2.1 系统适应性试验 　　在“1.2.1”项色谱条件下检测，绿原酸的保留时间为5.1 min，黄芩苷的保留时间为13.1 min，得到了良好的分离，理论塔板数均3000，且阴性供试品溶液不干扰测定（图1）。 　　2.2 精密度试验 　　分别吸取高、中、低3个质量浓度的绿原酸和黄芩苷对照品溶液，在1 d内重复进样5次并连续进样5 d；计算绿原酸的日内精密度RSD值分别为1.09%、1.05%、0.99%；日间精密度RSD值分别为2.08%、2.12%、2.09%；黄芩苷的日内精密度RSD值分别为1.17%、1.03%、1.21%；日间精密度RSD值分别为2.87%、2.25%、2.21%。 　　2.3 稳定性试验 　　精密称取对照品，按“1.2.2”项下的方法制得对照品溶液（20 μg/ml），每隔2 h左右进样1次，结果提示黄芩苷和绿原酸峰面积在8 h内无明显变化，表明对照品稳定性