烧伤后增生性瘢痕患者血清中TGF—β和VEGF浓度检测及意义.docVIP

烧伤后增生性瘢痕患者血清中TGF—β和VEGF浓度检测及意义 　　[摘要]目的：探讨烧伤后增生性瘢痕患者血清中TGF-β、VEGF浓度变化及意义。方法：选择2009，8～2011，8我科住院的烧伤后增生性瘢痕患者共74例，根据创面愈合后瘢痕增生时间长短分组，分为4组，选择12例正常人作为正常对照组，共5组。用酶联吸附法（ELISA）检测患者血清中TGF-β、VEGF的浓度，5组之间统计比较分析。结果：瘢痕患者血清中TGF-β、VEGF含量与瘢痕增生时段关系密切，1～3月早期瘢痕组血清中TGF-β、VEGF含量开始增加，随瘢痕的发展升高，4～6个月瘢痕组血清中TGF-β、VEGF含量达到了高峰。随着瘢痕成熟，TGF-β、VEGF浓度又逐渐下降。结论：烧伤后增生性患者血清中TGF-β、VEGF的含量可较好地反映增生性瘢痕代谢活跃程度，是增生性瘢痕增生活跃程度敏感的标记物。 　　[关键词]增生性瘢痕；烧伤后；血清；标记物；TGF-β；VEGF 　　[中图分类号]R619+.6 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2014）04-0292-03 　　增生性瘢痕（Hypertrophic scar， HS）是以胶原纤维等细胞外基质过度生成、沉积为特征的皮肤纤维化疾病 [1]。临床治疗方法多样，但是缺乏十分有效的治疗手段。另外，目前临床上尚缺乏一种准确、可重复评价瘢痕增生程度的指标，不利于抗瘢痕药物与方法的疗效评价、优化与筛选，也深刻影响着瘢痕治疗的进展。 　　转化生长因子β（Transforming growth factorβ，TGF-β）与血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）是目前研究得比较透彻的，对瘢痕增生起明显促进作用的细胞因子，两因子均可在瘢痕组织局部表达、分泌，其表达的量甚至与瘢痕增生的程度密切相关[2-5]。那么这两种瘢痕形成促进因子是否能够分泌入血液，能不能通过检测烧伤后瘢痕患者血液中TGF-β、VEGF两因子的浓度来评价瘢痕增生的程度，该实验在这方面进行了有益的探索。 　　1 对象和方法 　　1.1 病例及标本的选择：选择2009，8～2011，8期间，我烧伤整形外科住院的烧伤后瘢痕患者74例，分属于瘢痕增生的不同时期。其中男49例，女25例，最大年龄55岁，最小年龄18岁，平均年龄为（27.9±13.4）岁，所有受试者均无妊娠，无罹患其它结缔组织疾病，亦无其它影响检???结果的局部或全身性疾病，为了减少瘢痕面积对实验结果的影响，规定瘢痕面积均不得大于体表面积的10%。另选12例健康人群作为正常对照组，所采取的检测均获得受试者或其家属知情同意，经医院伦理委员会审核通过。74例瘢痕患者根据创面愈合后瘢痕增生的不同时段分组，分为4组： ①1～3月的早期瘢痕组；②4～6月的瘢痕组；③7～12月的瘢痕组：④1年以上的接近成熟期的增生性瘢痕组。与正常对照组一起，共为5组。检测其血清中TGF-β、VEGF的浓度的水平。 　　1.2 主要试剂和仪器：试剂盒来自于北京生物技术研究所，其它为常用试剂。采用生物素双抗夹心酶联免疫吸附法（ELISA）对标本血清中TGF-β、VEGF含量进行测定。 　　1.3 实验标本的制备：抽取静脉血2ml，置干燥管，室温下静置3h，在3000rpm离心机内离心，离心15min。用移液管移取血清0.5ml，置于离心管，标本放于-70℃超低温冰箱内保存，待标本收集完成后，对实验标本统一进行检测，以避免不同批次实验试剂和实验操作人员对实验结果产生影响。 　　1.4 用ELISA试剂盒对血清中TGF-β、VEGF的浓度进行检测：标本解冻。标准品的稀释。根据待测样品数量决定所需的板条数。加样：①空白管对照孔不加样品、生物素标记的抗TGF-β1抗体以及链霉素亲和素-HRP，只加显色剂AB和终止液，其余操作相同；②标准品孔：加入标准品50μg，链霉素亲和素-HRP（标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加）；③待测样品孔：加入样本40μl，然后各加入抗TGF-β1抗体10μl、链酶亲和素-HRP，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育60min。配液、洗涤、显色、终止按试剂盒要求操作。最后测定：用空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值），根据标准品的浓度以及对应OD值计算出保准曲线的直线方程，再根据样品的OD值在回归方程上算出对应的样品浓度。 　　1.5 实验结果统计学分析：实验结果用SPSS统计软件13.0进行分析。P 　　实验结果显示不同时期的瘢痕组织合成的TGF-β、VEGF能够入血全身分布，表现为患者血清中TGF-β、VEGF的浓度不同程度的升高，两因子的浓度变化与瘢痕临床演进过程基本一致。1～3月