雌激素药物对大鼠子宫内膜异位症OPN、MMP—9表达影响.docVIP

雌激素药物对大鼠子宫内膜异位症OPN、MMP—9表达影响 　　摘要] 目的 探讨雌激素药物（丙氨瑞林、米非司酮、孕三烯酮）对大鼠子宫内膜异位症（EMS）OPN、MMP-9表达的影响。 方法 将建模成功的36例实验用大鼠随机性地均分为四组，各9例，分别给予丙氨瑞林、米非司酮、孕三烯酮三种雌激素类药物干预，另外使用酵母片进行干预，1个月后将大鼠杀死，将其在位与异位内膜取出，运用RT-PCR法对OPN与MMP-9蛋白及基因表达进行分析、测定。 结果 三组雌激素药物干预组干预后在位内膜与异位内膜中的OPN与MMP-9的表达均要明显低于干预前，且干预前后差异存在高度统计学意义（P 0.05），但干预后雌激素干预组异位内膜中MMP-9表达明显强于在位内膜（P 0.05）。 结论 雌激素类药物能够降低大鼠在位及异位内膜中OPN与MMP-9的表达能力，且对异位内膜中的OPN表达能力的抑制作用要明显强于在位内膜，对在位内膜中的MMP-9表达能力的抑制性作用不亚于对异位内膜；雌激素类药物可能通过对局部病灶OPN及MMP-9表达能力的抑制作用进行抑制来减小细胞的侵袭及黏附性能。 　　[关键词] EMS模型鼠；丙氨瑞林；米非司酮；孕三烯酮；子宫内膜异位症；OPN；MMP-9 　　[中图分类号] R711.71 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2013）06-0004-06 　　子宫内膜异位症（EMS）虽然为一种良性的妇产科疾病，但具有非常明显的异地黏附、侵袭、转移以及复发等类似于恶性肿瘤的生物学行为[1]。骨桥蛋白（osteopontin， OPN）属于一种细胞信息传导通路中的重要的磷酸化基质蛋白，能够促进细胞黏附、侵袭以及抗凋亡能力等方面的生成[2]。MMP-9与MMP-2能够一同促进血管内皮细胞的出芽，从而促使新生血管的形成，在子宫内膜细胞的异位黏附、种植以及生长的过程中扮演着极为重要的角色[3，4]。本研究采用实验的形式，根据移植法的相关要求及内容，构建EMS动物模型，对OPN、MMP-9在子宫内膜异位症大鼠的在位及异位病灶中蛋白与基因表达方面的差异性进行检测，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　选取健康性成熟未交配的36只SD雌性大鼠，体重为205～243 g，平均体重（225.2±33.1） g，由我院实验动物中心提供，对其进行常规饲养。 　???1.2 实验器材与试剂 　　1.2.1 实验仪器 RT-PCR所需要的引物以及相应的试剂均购自于上海生工生物工程技术服务有限公司。 　　1.2.2 试剂 一抗OPN（SC-21742）以及PV-9000二步法免疫组化检测试剂盒均购自于北京中杉金桥有限公司，MMP-9购自于北京博奥深有限公司；丙氨瑞林（上海丽珠制药有限公司生产，国药准字；米非司酮（浙江仙居君业药业有限公司生产，国药准字；孕三烯酮（秦皇岛紫竹药业有限公司生产，国药准字。 　　1.3 实验分组 　　取建模成功的36只大鼠随机性地均分为以下四组，每组9只：①对照组：酵母片半片/d，连续用药1个月；②丙氨瑞林组（GnRH组）：GnRH 7.5 μg/250 g皮下注射每天1次，连续使用1个月；③米非司酮组：0.62 mg/250 g每日1次，连续使用1个月；④孕三烯酮组：0.062 mg/次，每周使用两次，连续使用1个月。两组大鼠均取在位内膜以及异位内膜组织。所取组织可以分为如下两个部分：一部分取材之后立即于-80℃温度条件下进行冷冻保存（PCR实验用），另外一部分做成石蜡标本（免疫组化用）[5-7]。 　　1.4 免疫组化SP法检测OPN、MMP-9的表达 　　免疫组化步骤应严格参照说明书上的操作说明来进行，切片经过DAB显色之后在高倍镜下进行组织学观察。上述四组干预前后在位以及异位内膜组织的切片均随机取5个重叠度低的高倍镜视野（实验中选择400倍最佳），应用Image Proplus 6.0图像分析系统计算每高倍镜视野之下的OPN以及MMP-9的积分吸光度值（IOD）的均值[8，9]。 　　1.5 统计学处理 　　本研究中的数据均由SPSS16.0软件进行统计及分析，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，以P 0.05）；丙氨瑞林、米非司酮、孕三烯酮组在位内膜与异位内膜治疗前后MMP-9的表达差异有统计学意义（P 0.05）；丙氨瑞林、米非司酮、孕三烯酮组在位内膜与异位内膜治疗前后OPN mRNA及MMP-9 mRNA的表达差异有统计学意义（P 0.05），但是干预后雌激素干预组异位内膜中MMP-9表达明显强于在位内膜（P 0.05）。 　　综上所述，雌激素类药物能够降低大鼠在位及