第十二篇 DNA合成—复制.docVIP

《动物生物化学》授课内容 内 容 备 注 第十二章 DNA合成—复制 概念：遗传中心法则 1、遗传信息贮存在DNA上，通过以单链为模板合成两个完全相同的子代方式，将信息传递给子代，称为复制。 2、以DNA为模板指导合成RNA（转录）后，再以RNA为模板指导合成蛋白质（翻译），将DNA上的遗传信息以蛋白质的形式和相应的功能表达出来。称为遗传中心法则。 3、RNA病毒是以RNA为遗传信息的载体。这种特殊的RNA也可以进行自我复制，并在相应逆转录酶存在下，将信息逆转录合成DNA，然后沿中心法则的方式进行信息传递。 半保留复制（semiconservative replication） 复制前，双螺旋的氢键断裂形成单链，再以单链为模板，合成各自互补链，产生2个与亲链完全一样的子代DNA。 每个子代双链中均含有一条亲代模板链和一条新合成链（旧、新单链互补结合而成）。 13.1 复制因子 DNA复制系统由多种蛋白酶、RNA引物和Mg2+等组成。 （1）DNA聚合酶 以脱氧核苷酸为底物，以DNA为信息模板，在Mg2+存和引物存在条件下，催化合成DNA链。 DNA合成方向从5′→3′，即dXNA的5′位磷酸加到引物的3′端OH，脱焦磷酸形成二酯键。 原核细胞以大肠杆菌（E.coli）DNA聚合酶为代表. 聚合酶Ⅰ 单链，101000;5′→3′聚合；3′→5′外切（校对功能。3′端接 上错误核苷酸后将被切除）；5′→3′水解（可以切除引物和修复性切除）。 聚合酶Ⅱ 多亚基蛋白酶，88000；具5′→3′聚合，3′→5′外切 作用； 但合成速度很慢，主要为切除修复的功能。 聚合酶Ⅲ 有10个亚基，900000；具5′→3′聚合，3′→5′外切作用； 合成速度最快，是DNA复制的主要合成酶。 真核细胞也有功能类似的聚合酶（有五种）： 聚合酶α、δ是主要合成酶（具5′→3′聚合和校正功能）； 聚合酶β、ε为主要的修复酶； 聚合酶γ主要存在于线粒体，含量极少，负责线粒体DNA的修复。 （2）DNA连接酶 催化双链中单链切口处5′—P与3′—OH间的共价连接；消耗ATP(真核)或NADH (原核)供能。 对单链分子不起作用。 （3）DNA构象转换因子 参与DNA分子的解链、解旋、稳定单链作用。 DNA解旋酶： 多数DNA都有负超螺旋，由拓扑异构酶产生或解除。 （E.coli的解链酶称为danB蛋白，或称rep蛋白） 拓扑异构酶Ⅰ 可切双链中的一条单链，放出应力后再连接，无能量消耗； 拓扑异构酶Ⅱ 具双链内切酶与连接酶双重功效；消耗ATP；先切开双链， 释放应力（或引入负超螺旋），再封闭切口。但没有解链功 能（不能打开氢键）。 注：拓扑异构酶在原核、真核生物都存在 DNA解链酶： 具识别复制原点的特殊位点；促链间氢键断裂、分离为单链，解螺旋；消耗ATP（具有依赖DNA的ATPase活性）；降低DNA的Tm；（与SSB联合，打开DNA双链，并维持单链稳定）。 E.coli的解链酶称为danA蛋白 链结合蛋白（SSB）： 紧密结合到单链DNA上，使DNA单链不能互补结合，并保护单链不被核酸酶降解，维持单链稳定性。 （4）引物及合成酶 引物链为一段特殊RNA，聚合酶在此链基础上合成延长DNA。专一合成此RNA的称为引物酶。 DNA聚合酶不能从头合成DNA，只能延长DNA； 原核生物的引物为40—50核苷酸，动物病毒有80个，真核生物有5—10个。 引物（发）酶（E.coli中为danG蛋白），单链，以多酶复合物形式存在在。引物酶只在形成复合体时才有活性。 引物RNA能与模板DNA以氢键配对结合，形成局部杂交链。 合成引物时，多酶复合体与拓扑异构酶等配合，对DNA局部进行解旋，暴露出后续的DNA序列，有利于DNA聚合酶复制，称为“转录激活”。 （5）原料等其他条件 1、四种脱氧核糖核酸（dXTP）；