第六篇 生物技术.pptVIP

第六章 生 物 技 术 第一节 基 因 工 程 人工接尾法 即同聚物加尾连接法。当载体和目的基因无法采用同一种限制酶进行切断，无法得到相同得粘性末端时，可采用此方法。 此法首先使用单链核酸酶将粘性末端切平，再在末端核苷酸转移酶的催化下，将脱氧核糖核苷酸添加于载体或目的基因的3-端，如载体上添加一段polyG，则可在目的基因上添加一段polyC，故二者即可通过碱基互补进行粘合，再由DNA连接酶连接。 人工接头连接法 将人工连接器（即一段含有多种限制酶切点的DNA片段）连接到载体和目的基因上，即有可能使用同一种限制酶对载体和目的基因进行切断，得到可以互补的粘性末端。 由于重组体导入宿主细胞的比例通常较低，因此需要对含有重组体的宿主细胞进行筛选并作鉴定。可采用以下方法进行： ? 根据重组体的表型进行初筛： 对于带有抗药基因的质粒重组体，可采用插入灭活法进行筛选。如pBR322中带有抗氨苄青霉素和抗四环素基因，当将目的基因插入抗四环素基因后，就可引起该基因失活，细菌对氨苄青霉素耐药，而对四环素敏感。在含氨苄青霉素的培养基上能够生长，而在含四环素的培养基上不能生长的细菌即为带重组体的细菌。 为了进一步鉴定重组基因体中的目的基因，可采用与目的基因部分互补的DNA片段作为探针，与含有重组体的细菌菌落进行杂交，经放射自显影，如结果为阳性，即可确定重组体中带目的基因。 第二节 细 胞 工 程 四、转基因动植物 1982年帕米特以小鼠为对象将大鼠的生长激素转入小鼠中。 改良品种 抗逆 生产药物 转生长激素基因动物 转基因瘦肉型猪 抗病：抗烟草花叶病烟草 抗虫：抗虫棉 抗冻：抗冻蛋白基因的转基因鱼 抗除草剂：转基因烟草 转基因烟草生产天花粉蛋白 转基因烟草生产胰岛素 转基因动物 抗虫棉 细胞工程主要采用工程设计的方法运用精巧的细胞学技术，有计划的改造细胞遗传结构，从而培养出人们所需要的动植物品种或具有新性状的细胞群体，造福社会。 它主要包括细胞培养、细胞融合、细胞重组及遗传物质转移等四个方面。 一、细胞培养 细胞培养就是把细胞从体内取出然后接种在特制的培养容器内，并给予必要的生长条件，使它们在体外继续生长繁殖。 决定因素 营养：合适的培养基 生长条件：温度、pH、无菌 细胞培养的意义 用于无性系的快速繁殖和生产 用于遗传学、遗传工程研究、 代谢、发育的研究 1、动物细胞培养 将取出的组织剪碎 单细胞 接入培养瓶 37度 细胞培养 传代 胰蛋白酶 消化 2、植物细胞培养 植物细胞具有全能性 常用培养方法 花粉培养 体细胞培养 原生质体培养 （1）、花粉培养 孕穗期颖花 接种的花粉 花粉发育 长出愈伤组织 花粉植株 （2）、体细胞培养 叶片、枝、芽 切段 消毒 接种 愈伤组织 传代 诱导生根、发芽 长出植株 *大连理工大学环境与生命学院 * 第一代生物技术（原始生物技术）：古代非纯 种微生物自然发酵工艺为标志的生物技术。 8000年前苏米尔人掌握制作啤酒技术 6000年前埃及人掌握制作面包技术 5000年前我国掌握酿酒技术 第二代生物技术（近代生物技术）：采用纯种 微生物的发酵工艺。 第三代生物技术（现代生物技术）：1973年基 因工程诞生为标志的生物工艺。 生物技术的发展过程 生物技术( Biotechnology )有时也叫生物工程( Bioengineering)，生物技术是通过技术性的运作对生物个体、活的或死的细胞、细胞成分进行控制和利用，包括了对这些生物材料的生产性及服务性的控制和利用。 实际上就是应用生物学的知识与工程学原理结合开发生物材料的产业，与微生物学、遗传学、生物化学、细胞生物学和分子生物学等学科有关 一般认为生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程。 基因工程 发酵工程 酶工程 细胞工程 上游技术 中游技术 在基因水平上改变生物遗传性状的技术（包括核酸的分离提取、体外剪切、拼接重组以及扩增与表达等技术）。 细胞的离体培养、繁殖、再生、融合。 利用生物细胞在生物反应器中生产特定产品的技术。 利用有机体内酶所具有的特异催化功能、借助固定化技术、生物反应器和生物传感器等新装置，高效优质生产特定产品的一种技术。 四大工程的关系 生物技术的特殊优越性 不可取代：如动植物的品种改良 快速、精确：如单克隆抗体对于疾病检疫 低耗、高效：如生物合成色氨酸 副产物少、副作用低、安全性好：如生物疫苗 大力发展生物技术 许多企业涉入生物技术产业 我国“863”计划